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        免疫組織化學(xué)故障排除

        發(fā)布時(shí)間:2024-06-08
        弱染色或無(wú)染色
        來(lái)源
        解決方案
        脫蠟不充分 延長(zhǎng)切片脫蠟時(shí)間或更換新鮮二甲苯
        無(wú)活性的一抗 更換新一批抗體
        由于儲(chǔ)存不當(dāng),抗體無(wú)法發(fā)揮作用 將抗體分裝成較小的體積并儲(chǔ)存在冰箱中(-20 至 -70°c),并避免重復(fù)凍融循環(huán)?;蚋鶕?jù)制造商的說(shuō)明儲(chǔ)存抗體。
        抗體濃度太低 增加一抗和/或二抗的濃度?;蛘哌\(yùn)行連續(xù)稀釋測(cè)試以確定提供最佳信噪比的最佳稀釋度
        抗體孵育時(shí)間不足 增加抗體孵育時(shí)間
        組織固定不充分或不正確 增加后固定時(shí)間或嘗試不同的固定劑
        組織過(guò)度固定 減少后固定的持續(xù)時(shí)間。如果組織已經(jīng)過(guò)度固定,請(qǐng)執(zhí)行適當(dāng)或推薦的抗原修復(fù)程序。
        二抗和一抗不相容 使用可與一抗相互作用的二抗。例如,如果一抗是從兔子中產(chǎn)生的,則使用抗兔二抗
        無(wú)活性二抗 更換新一批抗體
        無(wú)活性 abc 試劑 更換新一批試劑
        酶底物系統(tǒng)有缺陷或不相容 更換新一批試劑
        底物孵育時(shí)間不足 增加底物孵育時(shí)間
        封固劑不正確 選擇正確的封固劑
        試劑使用順序錯(cuò)誤或步驟省略 檢查注釋或使用的程序
        過(guò)度染色
        來(lái)源
        解決方案
        一抗和/或二抗?jié)舛冗^(guò)高 降低抗體濃度或進(jìn)行滴定以確定一抗和二抗的最佳稀釋度
        孵化時(shí)間太長(zhǎng) 減少孵化時(shí)間
        孵化溫度太高 降低孵化溫度
        底物孵育時(shí)間太長(zhǎng) 減少底物孵育時(shí)間
        切片變干 避免切片變干
        高背景
        來(lái)源
        解決方案
        切片清洗不充分 步驟之間至少清洗 3 次
        組織含有內(nèi)源性酶,例如過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶 在孵育一抗之前,使用甲醇或左旋咪唑溶液(阻斷 ap)中的 3% 過(guò)氧化氫(阻斷過(guò)氧化物酶)阻斷內(nèi)源酶活性。
        組織含有內(nèi)源性生物素活性 在孵育一抗之前,使用親和素/生物素封閉試劑封閉內(nèi)源生物素活性。
        一抗與組織非特異性結(jié)合或抗體濃度過(guò)高 使用較高稀釋度的一抗可以減少非特異性結(jié)合
        二抗與組織的非特異性結(jié)合 用來(lái)自同一物種的正常血清作為二抗處理組織。
        二抗與類(lèi)似物種的組織發(fā)生交叉反應(yīng),即兔抗大鼠 igg 可能與小鼠組織發(fā)生交叉反應(yīng)。 使用預(yù)吸附的第二抗體,即在小鼠組織上使用兔抗大鼠igg,小鼠吸附,或在大鼠組織上使用兔抗小鼠igg,大鼠吸附。
        由于固定不充分導(dǎo)致組織抗原擴(kuò)散 增加后固定時(shí)間
        用于小鼠組織的小鼠抗體 一抗孵育前用 mouseonmouse 封閉試劑處理組織
        切片變干
        避免切片變干
        上一個(gè):論存茶的階段過(guò)程(上)
        下一個(gè):發(fā)動(dòng)機(jī)類(lèi)零件復(fù)合加工應(yīng)用分析

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