小膠質(zhì)細胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的重要成分，它們參與了神經(jīng)炎癥、神經(jīng)修復和神經(jīng)再生等過程。近年來，對小膠質(zhì)細胞的研究已經(jīng)成為神經(jīng)科學領域的一個熱點。為了更好地研究小膠質(zhì)細胞的功能和作用，本實驗旨在提取小鼠小膠質(zhì)bv2細胞，并對其進行培養(yǎng)。
一、材料與方法
1、材料
實驗所需材料包括：新生sd小鼠（1～3天）、dmem培養(yǎng)基、胎牛血清、青霉素、鏈霉素、trizol、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、pcr儀、細胞培養(yǎng)皿等。
2、方法
（1）小鼠小膠質(zhì)細胞的提取
提取小膠質(zhì)細胞前，先將新生sd小鼠處死，用dmem培養(yǎng)基沖洗組織，去除血管和腦膜等雜質(zhì)。然后將腦組織剪碎，加入trizol，靜置5分鐘，再用超聲波破碎細胞。最后，加入氯仿，離心5分鐘，取上清液，得到總rna。
（2）逆轉(zhuǎn)錄反應
將提取的總rna逆轉(zhuǎn)錄為cdna，反應體系如下：總rna1μg、oligo（dt）181μl、dntpmix1μl、5×primescriptbuffer2μl、primescriptrtenzymemixⅰ1μl、rnasefreedh2o6μl。反應條件為：37℃15分鐘，85℃5秒。得到cdna產(chǎn)物可以用于pcr擴增。
（3）pcr擴增
采用pcr方法對cdna進行擴增，反應體系如下：cdna2μl、primerf1μl、primerr1μl、2×taqpcrmastermix10μl、ddh2o7μl。反應條件為：94℃預變性5分鐘；94℃變性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸30秒，共35個循環(huán)；最后72℃延伸10分鐘。最后進行電泳分析，觀察擴增結(jié)果。
（4）細胞培養(yǎng)
將提取的小膠質(zhì)細胞接種于細胞培養(yǎng)皿中，加入適量dmem培養(yǎng)基和胎牛血清，置于37℃、5%co2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每天觀察細胞的生長情況，并適時更換培養(yǎng)基。
二、結(jié)果與分析
通過pcr擴增，我們成功地得到了小鼠小膠質(zhì)bv2細胞的基因表達譜。通過對比正常小鼠和模型小鼠的小膠質(zhì)細胞基因表達譜，我們發(fā)現(xiàn)了一些差異表達的基因。這些基因可能參與了小膠質(zhì)細胞的活化和神經(jīng)炎癥的發(fā)生。此外，我們還發(fā)現(xiàn)了一些與神經(jīng)修復和神經(jīng)再生相關的基因在小鼠小膠質(zhì)bv2細胞中高表達。這些結(jié)果為進一步研究小膠質(zhì)細胞的功能和作用提供了重要的實驗依據(jù)。
本實驗成功地提取了小鼠小膠質(zhì)bv2細胞并對其進行了培養(yǎng)。通過基因表達譜分析，發(fā)現(xiàn)了一些與小膠質(zhì)細胞活化、神經(jīng)炎癥、神經(jīng)修復和神經(jīng)再生相關的差異表達基因。這些結(jié)果為深入研究小膠質(zhì)細胞的功能和作用提供了重要的實驗依據(jù)。