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        EZElisa孕酮ELISA試劑盒試劑準(zhǔn)備&程序分析

        發(fā)布時(shí)間:2024-06-07
        孕酮是一種內(nèi)源性類固醇和孕激素性激素,參與人類和其他物種的月經(jīng)周期、妊娠和胚胎發(fā)育。它屬于一類被稱為孕激素的類固醇激素,并且是體內(nèi)主要的孕激素。孕酮還是合成其他內(nèi)源性類固醇(包括性激素和皮質(zhì)類固醇)的重要代謝中間產(chǎn)物,并作為神經(jīng)類固醇在腦功能中發(fā)揮重要作用。ezelisa™孕酮(pg)elisa試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)性抑制酶免疫測(cè)定技術(shù)。試劑盒中的微孔板已經(jīng)預(yù)包被了抗兔抗體。將標(biāo)準(zhǔn)品或樣品加入到適當(dāng)?shù)奈⒖装蹇字?,加入特異性抗孕酮抗體和辣根過(guò)氧化物酶(hrp)偶聯(lián)的孕酮。辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的孕酮與未標(biāo)記的孕酮通過(guò)與抗體發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性抑制反應(yīng)。加入底物溶液到孔中,顏色的發(fā)展與樣品中孕酮的含量相反。停止顏色的發(fā)展,并測(cè)量顏色的強(qiáng)度。
        艾美捷ezelisa孕酮elisa試劑盒基本參數(shù):
        目錄號(hào):d-aek0002
        規(guī)格:48t/96t
        儲(chǔ)存:在4°c下儲(chǔ)存12個(gè)月,避光。
        檢測(cè)范圍:0.5 ng/ml-30 ng/ml
        靈敏度:0.2 ng/ml
        精密度:內(nèi)部精密度:變異系數(shù)(cv)<15%。間接精密度:變異系數(shù)(cv)<15%
        回收率:回收率范圍為85%至115%,總體平均回收率為100%
        特異性:ezelisa™孕酮(pg)elisa試劑盒對(duì)孕酮的檢測(cè)具有高靈敏度和優(yōu)異的特異性。未觀察到孕酮與類似物之間的顯著交叉反應(yīng)或干擾。
        適用樣本:血清、血漿
        供應(yīng)材料和儲(chǔ)存條件:
        note: std1: 0 ng/ml; std2: 0.5 ng/ml; std3: 2 ng/ml; std4: 6 ng/ml; std5: 15 ng/ml; std6: 30 ng/ml.
        ezelisa孕酮elisa試劑盒試劑準(zhǔn)備:
        注意:使用前將所有試劑平衡至室溫。如果緩沖濃縮液中形成了晶體,請(qǐng)輕輕加熱,直到它們完-全溶解。
        1×洗滌緩沖液:將洗滌緩沖液(20×)用去離子水稀釋1:20,得到1×洗滌緩沖液。儲(chǔ)存在4°c。樣品制備
        1.血清:使用血清分離管,在室溫下凝固樣品30分鐘,然后以1,000 g的速度離心15分鐘。立即使用血清進(jìn)行檢測(cè),或?qū)悠贩盅b并儲(chǔ)存于-20°c。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
        2.血漿:使用edta、肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑采集血漿。在采集后30分鐘內(nèi)以1,000 g的速度離心15分鐘。立即進(jìn)行檢測(cè),或?qū)悠贩盅b并儲(chǔ)存于-20°c。避免反復(fù)凍融循環(huán)。注意:不要使用明顯溶血或脂質(zhì)混濁的樣本。如果樣品在24小時(shí)內(nèi)使用,可以儲(chǔ)存在2至8°c。避免反復(fù)凍融循環(huán)。在進(jìn)行檢測(cè)之前,冷凍樣品應(yīng)緩慢回溫至室溫,并輕輕混勻。
        程序分析:
        1.從板框中取出多余的微孔板條,放回包含干燥劑包的鋁箔袋中,并重新密封。
        2.每個(gè)孔加入50 μl的孕酮標(biāo)準(zhǔn)品或樣品。建議將所有標(biāo)準(zhǔn)品和樣品都復(fù)制加入微孔板中。設(shè)置一個(gè)不加任何溶液的空白孔。
        3.向每個(gè)孔中加入50 μl的hrp偶聯(lián)的孕酮(不加入空白孔),然后按照相同的順序向每個(gè)孔中加入50 μl的孕酮檢測(cè)抗體。充分混勻后,使用提供的板蓋覆蓋孔板,然后在37°c下孵育1小時(shí)。
        4.倒掉每個(gè)孔中的液體并進(jìn)行洗滌,總共重復(fù)三次洗滌過(guò)程。使用多通道移液器或自動(dòng)微孔板洗滌器,將每個(gè)孔填滿1×洗滌緩沖液(250 μl),靜置10秒鐘,每個(gè)步驟完-全去除液體對(duì)于良好的性能至關(guān)重要。在最后一次洗滌后,倒轉(zhuǎn)孔板并在干凈的紙巾上輕拍,去除任何剩余的1×洗滌緩沖液。
        5.向每個(gè)孔中加入50 μl的底物a和50 μl的底物b,充分混勻并使用提供的板蓋覆蓋。在37°c下孵育15分鐘。將孔板放置在黑暗中,遠(yuǎn)離氣流和其他溫度波動(dòng)。
        6.向每個(gè)孔中加入50 μl的停止溶液。停止溶液應(yīng)按照hrp底物的順序加入孔板中??字械念伾珣?yīng)從藍(lán)色變?yōu)辄S色。如果孔中的顏色是綠色,或者顏色變化不均勻,請(qǐng)輕輕敲擊孔板以確保充分混勻。
        7.在30分鐘內(nèi)使用設(shè)置為450 nm的微孔板讀數(shù)器測(cè)定每個(gè)孔的吸光度。
        注:
        1.不要將試劑與其他批次或來(lái)源的試劑混合或替換。
        2.為了避免交叉污染,在每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)水平的添加之間和樣品之間更換移液管尖-端添加以及試劑添加之間。此外,每個(gè)試劑使用單獨(dú)的儲(chǔ)液器。
        3.為了確保準(zhǔn)確的結(jié)果,在培養(yǎng)步驟中需要適當(dāng)粘附板蓋。
        4.停止溶液具有一定的腐蝕性。操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施
        該試劑僅用于科學(xué)研究領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。
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