牛血清白蛋白albumin from bovine serum,bsa,是牛血清中的簡(jiǎn)單蛋白,是血液的主要成分(38g/100ml),分子量66-68kd,等電點(diǎn)4.8,含氮量16%,含糖量0.08%。僅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白由581個(gè)氨基酸殘基組成,其中35個(gè)半胱氨酸組成17個(gè)二硫鍵,在肽鏈的第34位有一自由巰基。白蛋白可與多種陽離子、陰離子和其他小分子物質(zhì)結(jié)合。血液中的白蛋白主要起維持滲透壓作用,貢獻(xiàn)80%的滲透壓、ph緩沖作用、營(yíng)養(yǎng)作用,載體作用,可以攜帶眾多的物質(zhì)進(jìn)行循環(huán),包括脂肪酸,金屬離子,膽紅素,激素和藥物。
牛血清白蛋白albumin from bovine serum,bsa,又稱為組分v,或cohn v,名稱起源于bsa分餾法cohn冷乙醇法,cohn法仍然是目前非常普遍的bsa分餾法,除了了冷乙醇法,目前主要的還有熱休克法和色譜層析法。
一、cohn冷乙醇法
cohn冷乙醇法是由哈佛大學(xué)edwin cohn教授于1946年發(fā)明的,基于戰(zhàn)爭(zhēng)創(chuàng)傷治療對(duì)注射級(jí)別的蛋白的大規(guī)模需求,cohn教授在較低的溫度下改變血漿的乙醇濃度和ph值,使其所含蛋白在不同的乙醇濃度下析出,在第五個(gè)析出的組分中主要成分即為bsa,所以bsa又稱組分v或cohn v。
cohn法是早期的bsa分餾法,為后續(xù)的bsa分餾提供了重要的思路,但是cohn法過程中血漿蛋白涉及乙醇和低ph酸變性,以及多種雜蛋白干擾,所以分餾的bsa的質(zhì)量上差強(qiáng)人意,相比其他更先進(jìn)的分餾法,存在許多問題:
bsa蛋白變性,片段化,活性低;
bsa純度較低,雜質(zhì)含量高;
bsa產(chǎn)量低;
適用一般實(shí)驗(yàn),很難用于細(xì)胞培養(yǎng)。
二、熱休克法
cohn法為大規(guī)模生產(chǎn)bsa提供了思路,但是因?yàn)樯婕芭R床使用,生產(chǎn)的bsa需要進(jìn)行肝炎病毒滅活,血漿在9%乙醇和ph6.5的時(shí)候加熱至68度;熱休克法一般需要添加辛酸維持bsa不被變性。
熱休克法生產(chǎn)的bsa產(chǎn)量高,純度也高,逐漸取代cohn法成為bsa分餾主要方法,但是熱休克法bsa也有一些缺陷:
bsa蛋白高溫變性,活性低;
辛酸對(duì)細(xì)胞有損傷,不適合細(xì)胞培養(yǎng);
純度低,加熱會(huì)產(chǎn)生很多變性bsa多聚體和一些片段化bsa,同時(shí)也會(huì)產(chǎn)生很多其他變性蛋白。
下面是biosera品牌下的牛血清白蛋白:
1. pm-t1725
牛血清白蛋白 (bsa) 凍干 ph~7
100克/500克/1000克
2. pm-t1726
牛血清白蛋白 (bsa) 無蛋白酶凍干
100克/500克/1000克
3. pm-t1727
牛血清白蛋白 (bsa) 不含脂肪酸凍干
100克/500克/1000克
4. sa-296
牛血清白蛋白 (bsa) 30%
1000毫升
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