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        大鼠血小板第四因子(PF-4)ELISA試劑盒產(chǎn)品簡(jiǎn)介

        發(fā)布時(shí)間:2024-08-21
        大鼠血小板第四因子(pf-4)elisa試劑盒產(chǎn)品簡(jiǎn)介
        大鼠血小板第四因子(pf-4)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
        大鼠血小板第四因子(pf-4)elisa試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(elisa)。往預(yù)先包被大鼠血小板第四因子(pf-4)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、hrp標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過溫育并徹di洗滌。用底物tmb顯色,tmb在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠血小板第四因子(pf-4)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(od 值),計(jì)算樣品濃度。
        樣本處理及要求
        1. 血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
        2. 血漿:用edta或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
        3. 組織勻漿:用預(yù)冷的pbs (0.01m, ph=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的pbs(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9ml的pbs,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在pbs中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測(cè)。
        4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請(qǐng)1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
        注:標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
        需要而未提供的試劑盒器材
        1.酶標(biāo)儀(450nm)
        2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10ul、2-20ul、20-200ul、200-1000ul
        3.37℃恒溫箱
        4.蒸餾水或去離子水
        名稱
        96孔配置
        48孔配置
        備注
        微孔酶標(biāo)板
        8孔×12條
        8孔×6條

        標(biāo)準(zhǔn)品
        0.3ml*6管
        0.3ml*6管

        樣本稀釋液
        6ml
        3ml

        檢測(cè)抗體-hrp
        10ml
        5ml

        20×洗滌緩沖液
        25ml
        15ml
        按說明書進(jìn)行稀釋
        底物a
        6ml
        3ml

        底物b
        6ml
        3ml

        終止液
        6ml
        3ml

        封板膜
        2張
        2張

        說明書
        1份
        1份

        自封袋
        1個(gè)
        1個(gè)

        備注:
        1、標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:詳見說明書;
        2、經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi),實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μl樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
        注意事項(xiàng)
        1、嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
        2、洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
        3、消除板底殘留的液體和手指印,否則影響od值。
        4、底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
        5、避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。
        6、在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
        7、平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
        8、任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
        9、不能使用過期產(chǎn)品。
        10、如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。
        試劑準(zhǔn)備
        試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。
        20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
        操作步驟
        1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
        2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μl;
        3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μl;空白孔不加。
        4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(hrp)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μl,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
        5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μl),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
        6.每孔加入底物a、b各50μl,37℃避光孵育15min。
        7.每孔加入終止液50μl,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的od值。
        實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算
        以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的od值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的od值代入方程,計(jì)算出樣品的濃度。
        試劑盒性能
        1、檢測(cè)范圍:詳見產(chǎn)品說明書。
        2、靈敏度:最di檢測(cè)濃度小于0.1u/l。
        3、特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
        4、重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于15%。
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