小鼠elisa試劑盒基本原理:
① 抗原或抗體能吸附到固相載體表面,并保持其免疫學(xué)活性;
② 抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,仍保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;
③ 酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。
小鼠elisa檢測試劑盒說明書樣品收集、處理方法:
1、血清-----室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心
2、血漿-----應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇edta、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心
3、細(xì)胞培養(yǎng)上清---檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清
4、組織標(biāo)本-----切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的pbs,ph7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的pbs(ph7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用
5、培養(yǎng)細(xì)胞----- 檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用pbs(ph7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。