羊口蹄疫病毒o型抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
使用說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名：羊口蹄疫病毒o型抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：test kit for antibodies to sheep foot and mouth disease virus o （elisa）
【包裝規(guī)格】 96t×1/盒、96t×2/盒、96t×5/盒
【預(yù)期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus，fmdv）引起的偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，其特征為口腔黏膜、蹄部、乳房皮膚發(fā)生水泡和爛斑。
本試劑用于檢測羊血清中口蹄疫病毒o型抗體，可用于口蹄疫病毒o型疫苗免疫效果評價。
【原 理】
本試劑盒由預(yù)包被口蹄疫病毒o型抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（elisa）原理檢測羊血清樣本中口蹄疫病毒o型抗體。實驗時在酶標(biāo)板中加入待檢樣本和抗體工作液，經(jīng)溫育后洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加tmb底物液，若樣品中含有口蹄疫病毒o型抗體則將阻斷抗體工作液與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，從而使后續(xù)反應(yīng)不出現(xiàn)顯色；反之則出現(xiàn)顯色；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負(fù)相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有口蹄疫病毒o型抗體。
【試劑盒組成】
序號
名稱
規(guī)格/96t×1
規(guī)格/96t×2
規(guī)格/96t×5
1
酶標(biāo)記物
11ml×1(紅蓋)
11ml×2(紅蓋)
26ml×2(紅蓋)
2
抗體工作液
6ml×1(藍(lán)蓋)
11ml×1(藍(lán)蓋)
26ml×1(藍(lán)蓋)
3
20x濃縮洗滌液
40ml×1(白蓋)
40ml×1(白蓋)
200ml×1(白蓋)
4
底物液a
6ml×1(白蓋)
11ml×1(白蓋)
26ml×1(白蓋)
5
底物液b
6ml×1(黑蓋)
11ml×1(棕蓋)
26ml×1(黑蓋)
6
終止液
6ml×1(黃蓋)
11ml×1(黃蓋)
26ml×1(黃蓋)
7
陽性對照
1.0 ml×1(紅蓋)
1.5 ml×1(紅蓋)
2.0 ml×1(紅蓋)
8
陰性對照
1.0 ml×1(綠蓋)
1.5 ml×1(綠蓋)
2.0 ml×1(綠蓋)
9
酶標(biāo)板
96t×1
96t×2
96t×5
10
蓋板膜
1
2
5
11
自封袋
1
1
2
12
說明書
1
1
1
【儲存及有效期】2～8℃保存，有效期12個月。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。
【適用儀器】含450nm、630nm波長的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
2.待檢血清樣本恢復(fù)室溫、混勻待用。陰、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl；樣品孔每孔先加入45μl工作洗滌液,再加入5μl血清樣本。
4.每孔加抗體工作液50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水?。┍芄夥磻?yīng)30分鐘。
5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加350μl工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，最后一次拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔依次加底物液a、底物液b各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)15分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（a值）。
【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照吸光值≥0.8，陽性對照吸光值≤陰性對照吸光值×50%。
【檢驗結(jié)果的解釋】
1. pi（阻斷率）=（1- 陰性對照平均a值(樣本a值)）×100%，pi≥50%為陽性；pi＜50%為陰性。
2.本實驗結(jié)果為陰性時表明抗體水平不足，建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測羊血清中口蹄疫病毒o型抗體，根據(jù)pi值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評估。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶，使用時需恢復(fù)至室溫以溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8.不同批號試劑組分不得混用。