摘要：本應用簡報重點介紹了使用配備 fid 的 agilent 7890b gc 與 agilent 5977a msd系統(tǒng)聯(lián)用開發(fā)血醇濃度的測定方法。fid 和 msd 檢測方法的組合不僅能精確定量血醇濃度，還能在復雜的血液樣品基質中以譜圖形式確認乙醇的存在。
前言：血醇含量 (bac) 能夠直觀地反映酒駕人員在駕駛車輛時駕駛能力的受損程度。為方便處理酒駕案件，執(zhí)法機構規(guī)定了血醇含量的閾值。呼吸酒精檢測儀和現(xiàn)場清醒測試為駕駛能力受損程度提供了主觀判斷指標。而法庭辯護中需要使用乙醇濃度的定量值，因此血醇濃度測定成為毒理學實驗室最常進行的項目。由于樣品的數(shù)量龐大且保存時間較短，毒理學實驗室需要一種快速、準確且可靠的血醇含量檢驗方法。執(zhí)法實驗室普遍使用的方法為頂空氣相色譜法 [1]。雖然這種技術能滿足多數(shù)執(zhí)法實驗室的需求，但樣品的殘留或污染物的共流出現(xiàn)象可導致假陽性結果的產生，從而大大提高了對質譜確認乙醇存在的需求，這就超出了氣相色譜與雙火焰離子化檢測器聯(lián)用系統(tǒng) (gc-fid) 的常規(guī)分析能力。使用配備火焰離子化檢測器 (fid) 的頂空氣相色譜儀和質譜儀 (ms)，可對血液中乙醇同時進行定量分析與譜圖確認。本應用測試了agilent 7697a 頂空進樣器、配備fid 的 7890bgc 以及 5977a gc/ms 的組合對血液中乙醇化合物的分離、定量分析和確認。本研究的目的是證明加入的質譜法能夠驗證乙醇鑒定結果，并為數(shù)據(jù)提供更可靠的法律依據(jù)。安捷倫儀器可在快速的大容量分析中提供準確、精密的結果。
實驗部分本實驗使用配備分流/不分流進樣口和 fid 的 agilent 7890bgc、agilent 5977a gc/msd 以及 agilent 7697a 頂空進樣器。實驗設置如圖 1 所示。采用毛細管微板流路控制技術 (cft) 的兩通分流器將氣相色譜柱液流分流至 fid 和 ms檢測器。這一設計可為兩個檢測器同時提供準確可重現(xiàn)的流速（圖 2）。實驗所用軟件為 agilent masshunter gc/ms 采集軟件b.07.00.sp2 和 msd chemstation 增強版化學分析軟件f.01.00.1903。
儀器條件色譜柱 db-alc-1載氣 氦氣柱溫箱 55 °c 恒溫進樣口 帶 epc 的毛細管分流/不分流進樣口進樣口襯管 超高惰性襯管（部件號 5190-4047）氣相色譜儀 agilent 7890b gc檢測器 帶 epc 的 fidmsd agilent 5977a 質譜儀進樣器 agilent 7697a 頂空進樣器傳輸管 去活熔融石英（內徑 0.53 mm）cft 裝置 兩通吹掃分流器氣相色譜隔墊 流失性和溫度經過優(yōu)化 (bto) 的 11 mm 隔墊（部件號5183-4757）分流平板 超高惰性分流平板（部件號 5190-6145）cft 密封圈 可塑金屬密封圈（部件號 g3188-27502，用于內徑0.32 mm 的色譜柱；部件號 g3188-26503，用于內徑0.53 mm 的管線），內螺帽（部件號 gb2855-20530）進樣口/fid 85:15 vespel/石墨密封圈（部件號 5062-3514，10/包）msd 流速 1.25 ml/min
樣品前處理將 500 µl 各參比標樣溶液添加至 4.5 ml 蒸餾水和 5 µl 稀釋內標液中，配制乙醇參比標樣。將正丙醇用蒸餾水稀釋 10 倍制得內標儲備液 (istd)，得到 0.08 g/dl 的工作溶液最終標稱濃度。本實驗通過實際樣品分析評估了該方法的性能。使用單獨的混標配制乙醇校準品。
結果與討論圖 3 所示為多組分混標通過 db-alc1 色譜柱，根據(jù)分析物的分離和洗脫順序得到的 fid 和 ms 的組合信號色譜圖。圖 4 所示為多組分混標 fid 和 ms 峰的保留時間對齊圖。在乙醇達到基線分離的分析條件下，甲醇、異丙醇、丙酮等可能存在的樣品組分在 3 分鐘內實現(xiàn)分離。
為確定回收率，向校準標樣和樣品中添加正丙醇。使用0.02-0.4 g/dl 范圍內七個濃度的乙醇進行系統(tǒng)校準，每個濃度平行分析 10 次。圖 5 所示為在兩種檢測器上得到的乙醇校準曲線。如圖中所示，fid 和 ms 的校準曲線呈線性，r2 值分別為 0.9991 和 0.9989。樣品殘留是高濃度 bac 樣品分析的一大難題。本研究在重點檢測樣品間的殘留之余，還關注了由頂空進樣器中的潛在樣品殘留造成的污染。在驗證中，先分析含有高濃度乙醇 (0.4 g/dl) 的多組分混標，再分析 istd 空白。圖 6 確定 istd 空白中不含乙醇，說明本方法未發(fā)生樣品殘留
agilent chemstation 軟件提供了數(shù)據(jù)表示和數(shù)據(jù)比較的定制報告選項。圖 7 的樣品報告給出了樣品定量分析結果，其中 fid 響應用于定量分析，圖中還顯示了所采集質譜圖和 nist 質譜數(shù)據(jù)的比較結果。通過此報告可輕松查看濃度數(shù)據(jù)，并目測確認所分析樣品中存在的乙醇。系統(tǒng)的*設計使每種組分在 fid 和 msd 通道中的保留時間保持一致。
結論本研究證實，使用配備 fid 的 7890b gc 和 5977a msd 能夠快速得到穩(wěn)定準確的血醇濃度分析結果。將 7697a 頂空進樣器傳輸線與分流/不分流進樣口直接連接，并在高于大氣壓下進行 epc 控制的樣品瓶進樣，可在大校準范圍內獲得可重現(xiàn)的性能，同時避免殘留污染。epc 控制的 cft 可在 fid 和 msd 之間提供可重現(xiàn)的色譜柱分流流速，僅通過單次進樣即可同時進行乙醇的檢測與譜圖確認。即使在進樣挑戰(zhàn)性的高濃度乙醇之后，系統(tǒng)仍不會產生樣品間的殘留污染。此外，該方法利用 fid 檢測得到的定量結果以及質譜確認得到的譜圖確認結果，能夠為乙醇及其他目標物提供具有法律依據(jù)的數(shù)據(jù)。靈活的定制報告選項還可提供濃度信息、色譜圖示例以及采集譜圖與參比譜庫譜圖的比較結果。綜上所述，agilent7890b gc/fid 與 agilent 5977a msd 和 7697a 頂空進樣器共同組成了一種實用的工具，能夠為執(zhí)法實驗室提供精密、準確、可重現(xiàn)且具有法律依據(jù)的血醇濃度檢測和定量數(shù)據(jù)。
關鍵詞：氣相色譜儀 質譜儀 頂空進樣器 分流器 色譜柱