小鼠（mouse）血糖（bg）
elisa檢測(cè)試劑盒
使用說(shuō)明書
檢測(cè)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（elisa）。往預(yù)先包被血糖（bg）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、hrp標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物tmb顯色，tmb在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血糖（bg）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（od 值），計(jì)算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：edta、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標(biāo)儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10ul、2-20ul、20-200ul、200-1000ul
3. 37℃恒溫箱
操作注意事項(xiàng)
1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。
2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3. 濃度為0的s0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說(shuō)明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。
4. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱
96孔配置
48孔配置
備注
微孔酶標(biāo)板
12孔×8條
12孔×4條
無(wú)
標(biāo)準(zhǔn)品
0.3ml*6管
0.3ml*6管
無(wú)
樣本稀釋液
6ml
3ml
無(wú)
檢測(cè)抗體-hrp
10ml
5ml
無(wú)
20×洗滌緩沖液
25ml
15ml
按說(shuō)明書進(jìn)行稀釋
底物a
6ml
3ml
無(wú)
底物b
6ml
3ml
無(wú)
終止液
6ml
3ml
無(wú)
封板膜
2張
2張
無(wú)
說(shuō)明書
1份
1份
無(wú)
自封袋
1個(gè)
1個(gè)
無(wú)
注：標(biāo)準(zhǔn)品（s0-s5）濃度依次為：0、2、4、8、16、32 mmol/l
試劑的準(zhǔn)備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μl，浸泡1min，洗板5次。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μl；
3. 樣本孔先加待測(cè)樣本10μl，再加樣本稀釋液40μl；空白孔不加。
4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（hrp）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μl，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6. 每孔加入底物a、b各50μl，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μl，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的od值。
結(jié)果判斷
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)od值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)r值，大于等于0.9900。
2. 靈敏度：最di檢測(cè)濃度小于0.1 mmol/l。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6個(gè)月
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實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：
試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)
石蠟冰凍切片tunel凋亡熒光
掃描電鏡服務(wù)
實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目
透射電鏡服務(wù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)
石蠟/冰凍切片tunel凋亡
核仁組成區(qū)嗜銀-agnor染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)
細(xì)胞熒光染料標(biāo)記檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
rna結(jié)合蛋白免疫沉淀（rip）實(shí)驗(yàn)代做
he染色
六胺銀法染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)
天狼猩紅染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)
網(wǎng)狀纖維染色銀染實(shí)驗(yàn)服務(wù)
染色質(zhì)免疫沉淀分析(clip)實(shí)驗(yàn)服務(wù)
免疫組化ihc染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)
油紅o染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)
atp/adp檢測(cè)實(shí)驗(yàn)服務(wù)
蛋白雙向(2-d)電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)
免疫共沉淀（co-ip）實(shí)驗(yàn)代做
免疫細(xì)胞化學(xué)icc實(shí)驗(yàn)服務(wù)
pkc活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
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蛋白雙向2d-wb電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)
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