信帆生物細說：t細胞亞群檢測試劑盒的樣本制備方法以及操作步驟
信帆生物供應t細胞亞群檢測試劑盒，可以用于檢測cd3,cd4,cd8,試劑盒配抗體，試劑盒操作簡單，資料穩(wěn)定，深受廣大用戶青睞，歡迎大家咨詢！
t 細胞亞群檢測試劑盒說明書
一：試劑盒組成：
1.防脫片劑2ml
2.固定液10ml
3.a 小鼠抗人 cd3 單抗1ml
b 小鼠抗人 cd4 單抗1ml
c 小鼠抗人 cd8 單抗1ml
4.生物素標記羊抗小鼠 igg（ igg/bio）1.5ml × 2
5.堿性磷酸酶標記鏈霉卵白素(s-a/ap)1.5ml × 2
6.a 底物增強劑（40×)200μl
b 底物液（40×)200μl
c 底物緩沖液（10×)800μl
7.細胞核復染液5ml
8.封片劑1ml
9.記號筆1 支
10.pbs2 包(1000ml)
二：標本制備：
取肝素抗凝（25μl/ml）的靜脈血 1～2ml，pbs 稀釋 1-2 倍后，沿裝有等量淋巴
細胞分離液的試管壁混勻緩慢加至液面上層，保持兩種液體界面清晰，離心（2000
轉(zhuǎn)/分）15-20 分鐘，吸取兩液面交界處的單個核細胞層，加 5 倍 pbs，離心（1000
轉(zhuǎn)/分）5 分鐘，棄上清液，沉淀即為單個核細胞。利用試管中剩余的少許回流
液體（約一滴）混勻細胞，制成單個核細胞懸液。滴 30μl 細胞懸液于載玻片上，
靜置 2 分鐘使細胞下沉粘附于玻片上，吸去液體，快速吹干或 37℃溫箱 1 小時
烤干?；蛴?pbs 將單個核細胞調(diào)至 2×105個/ml，離心涂片機 1000 轉(zhuǎn)離心 1-2
分鐘制片，快速吹干或 37℃溫箱 1 小時烤干。涂片前取防脫片劑 5-10μl 均勻
推片，亦可用棉簽粘取防脫片劑均勻涂于干凈玻片上，待干后制備細胞涂片，以
防掉片。
三：顯色劑的配制：
分別取 a 液 25ul，b 液 25ul 置于干凈試管中混勻，室溫放置 2-5 分鐘，加 1ml
蒸餾水，混勻，再加 c 液 100ul 待用。
*使用前，根據(jù)所需顯色劑用量，按照以上比例現(xiàn)配現(xiàn)用。
四：標本染色：
1. 充分干燥（室溫 2 小時以上或過夜）的細胞涂片先用記號筆在標本外畫
圈，然后滴加固定液 50μl，室溫靜置 2-3 分鐘，用 pbs 淋洗，擦干玻片背面及
細胞外的 pbs。
*以下反應均需在濕盒中進行。
2. 分別滴加抗人 cd3、cd4、cd8 單抗適量(10-30μl）,4℃過夜，pbs 淋洗 3 次。
3. 滴加生物素標記抗小鼠 igg 適量（10-30μl），37℃孵育 30-45 分鐘，pbs
淋洗 3 次。
4. 滴加堿性磷酸酶標記鏈霉卵白素適量（10-30μl）37℃孵育 30-45 分鐘，pbs
淋洗 3 次。
5. 滴加顯色劑 30-50μl，室溫顯色 20-40 分鐘?？稍陲@微鏡下觀察，待細胞膜
上出現(xiàn)紅色標記物時，用 pbs 淋洗。
6. 滴加細胞核復染液 30-50μl，30 秒后自來水淋洗。
7. 滴加封片劑，蓋片封片，鏡檢。如不需保存亦可用水替代封片劑蓋片鏡檢。
五：觀察：
高倍鏡下選取染色好的視野記數(shù) 100-200 個單個核細胞，細胞表面有紅色標記物
為陽性細胞。算出陽性率。
六：正常參考值：
正常人外周血中，陽性細胞百分率一般在：cd3，60-80%；cd4，35-55%；cd8，
20-30%；cd4/cd8 的比值在 1.5-2.0 范圍內(nèi)。
七：儲存條件及有效期：
2-8℃保存，禁止冷凍，有效期為 12 個月。有效期內(nèi)可在 0-25℃范圍內(nèi)七天短
時運輸。使用時應及時及拿及用，使用后應立即放回冰箱。生產(chǎn)日期，使用期限
或失效日期見標簽。
八：注意事項：
1. 免疫細胞化學檢測是一種包含多步驟的檢測方法，試劑的選擇、樣本的處理、
涂片的制備、染色及其結(jié)果的判讀均需要進行專業(yè)的培訓。
2. 任何陽性或陰性的解讀，應由病理科醫(yī)生結(jié)合病理形態(tài)學，臨床表現(xiàn)及其它
檢測方法進行，不作為單獨的診斷指標。
3. 復染過度或不足都可能影響結(jié)果的判讀。
4. 陰性結(jié)果表示未檢出抗原，不一定表示樣本中無該抗原存在，待測抗原編碼
基因變異，抗原低表達或抗原修復不當?shù)?，都會造成抗原無法檢出。
5. 本試劑僅對經(jīng)處理的人外周血細胞進行驗證，不做其他用途
6. 試劑盒使用中，應有適當?shù)姆雷o措施，以避免試劑同皮膚和眼睛接觸。
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