細(xì)胞:htert-hpne細(xì)胞
中文名稱:人胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞
生長(zhǎng)特性:貼壁
培養(yǎng)基:1640培養(yǎng)基 血清:10%fbs(gibco胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% fbs、10% dmso
細(xì)胞傳代:
1):細(xì)胞密度約80%時(shí),吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,pbs緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加2~3 ml 0.25%yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意根據(jù)實(shí)際情況,把握消化時(shí)間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細(xì)胞層某處,即可肉眼可見(jiàn)細(xì)胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續(xù)消化)直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,把細(xì)胞層吹落,吹散。
3):取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4):注意培養(yǎng)基ph值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存。
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哺乳動(dòng)物細(xì)胞核的各個(gè)組成部分,都不是隨機(jī)排列的,它們的排列模式可以用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法測(cè)量,這種發(fā)現(xiàn)有助于研究細(xì)胞的運(yùn)作機(jī)制,對(duì)癌癥等疾病中,細(xì)胞核功能障礙進(jìn)行解釋。
發(fā)現(xiàn)支配一種重要控制蛋白在細(xì)胞核內(nèi)分布的空間相關(guān)性,與哺乳動(dòng)物細(xì)胞核內(nèi)其它成分相關(guān)。cbp蛋白分布廣泛,作用于細(xì)胞核內(nèi)的特定基因,并控制這些基因在細(xì)胞周期的特定時(shí)間內(nèi)表現(xiàn)。
利用熒光染劑對(duì)細(xì)胞核內(nèi)的成分進(jìn)行標(biāo)記,以鑒定cbp濃縮區(qū)(concentrated pocket)。在顯微鏡下觀察到的,是一個(gè)非常復(fù)雜的模式。
接下來(lái),對(duì)細(xì)胞核組成分中最近的鄰居之距離進(jìn)行測(cè)量,研制出一種工具,可以針對(duì)核內(nèi)可能與cpb有關(guān)的其它蛋白、基因域進(jìn)行測(cè)定.
還研制出一種模型,可用來(lái)分析更易定位于cbp袋附近的成分,最后得到了由cpb濃縮定位驅(qū)動(dòng)的細(xì)胞核組分定位的細(xì)胞核圖譜。
之所以選擇cpb,是因?yàn)閏pb是一個(gè)研究相當(dāng)透徹的基因調(diào)節(jié)劑,它可以改變作用基因的部分結(jié)構(gòu)而啟動(dòng)基因并表現(xiàn)特殊蛋白。
利用熒光染料和成熟的影像技術(shù),發(fā)現(xiàn)cpb區(qū)更傾向于定位在其作用的基因域附近。
關(guān)鍵詞:培養(yǎng)箱 顯微鏡