超碰在线91,国产第1页,国产精品99,最近中文字幕av

<video id="z2k50"><ins id="z2k50"></ins></video><small id="z2k50"><pre id="z2k50"><samp id="z2k50"></samp></pre></small>

    1. <video id="z2k50"><ins id="z2k50"></ins></video>

        小鼠胚胎干細(xì)胞(mES細(xì)胞)、小鼠iPS細(xì)胞培養(yǎng)Protocol

        發(fā)布時(shí)間:2024-06-08
        mef細(xì)胞鋪制:
        在t25培養(yǎng)瓶中加入0.2%明膠,搖勻后覆蓋底面即可,于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱至少放置15 min以上。 吸除0.2%明膠,加入事先水浴加熱至37℃的mef*培養(yǎng)液。一般地,一個(gè)t25培養(yǎng)瓶中加入5 ml mef*培養(yǎng)液。 按實(shí)驗(yàn)需要:小鼠胚胎干細(xì)胞使用km-r p3 mef或cf-1 p3 mef;小鼠ips使用icr-r p3 mef,復(fù)蘇mef細(xì)胞若干支。將凍存管從液氮中取出,置于37℃水浴中使之迅速融解,取出后拿到超凈臺(tái)內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋口處及外壁,防止污染。 將凍存管內(nèi)細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含2 ml mef*培養(yǎng)液的15 ml離心管內(nèi),以 1000 rpm,離心5 min,離心后將上清液吸除,另加入新鮮的mef*培養(yǎng)液1 ml,重懸后按照一個(gè)t25培養(yǎng)瓶鋪1´106的mef細(xì)胞,平均加入到t25培養(yǎng)瓶中,輕輕搖勻后置于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱。24 h以后可以傳入小鼠胚胎干細(xì)胞或小鼠ips細(xì)胞。 復(fù)蘇或傳代小鼠胚胎干細(xì)胞或小鼠ips細(xì)胞前,將t25培養(yǎng)瓶中的mef*培養(yǎng)液吸除,加入2 ml小鼠胚胎干細(xì)胞、小鼠ips細(xì)胞*培養(yǎng)液輕輕沖洗一遍后吸除,加入新鮮的小鼠胚胎干細(xì)胞、小鼠ips細(xì)胞*培養(yǎng)液待用。復(fù)蘇:
        將小鼠胚胎干細(xì)胞、小鼠ips細(xì)胞凍存管從液氮中取出,置于37℃水浴中使之迅速融解,取出后拿到超凈臺(tái)內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋口處及外壁,防止污染。 將凍存管內(nèi)細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含3-4 ml小鼠胚胎干細(xì)胞、小鼠ips細(xì)胞*培養(yǎng)液的15 ml離心管內(nèi),以1000 rpm,離心5 min。 離心后將上清液吸除,另加入新鮮的小鼠胚胎干細(xì)胞、小鼠ips細(xì)胞*培養(yǎng)液2 ml,吹打懸浮。 重復(fù)吹打,制成單細(xì)胞懸液,盡量避免氣泡。 轉(zhuǎn)移至1個(gè)已經(jīng)鋪好mef細(xì)胞的t25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。 每天更換小鼠胚胎干細(xì)胞、小鼠ips細(xì)胞*培養(yǎng)液。傳代:
        一般在復(fù)蘇后第2-3天傳代,視克隆大小和密度而定。 吸除廢液。 用pbs(不含鈣鎂離子)輕輕沖洗一遍。 加入1.0 ml的0.25%胰酶(含edta)至培養(yǎng)瓶,輕輕晃動(dòng),使胰酶覆蓋底面,置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)消化細(xì)胞。 在顯微鏡下觀察,直至細(xì)胞層全部脫落(一般需要1-2 min)。 加2 ml小鼠胚胎干細(xì)胞、小鼠ips細(xì)胞*培養(yǎng)液終止消化。 多次輕輕吹打細(xì)胞,制成單細(xì)胞懸液。 加入足量的小鼠胚胎干細(xì)胞、小鼠ips細(xì)胞*培養(yǎng)液,吹打混勻,細(xì)胞懸液分裝到鋪好mef細(xì)胞的t25培養(yǎng)瓶中。一般地,一個(gè)t25培養(yǎng)瓶加入5-6 ml培養(yǎng)液。 放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。 每天換液。傳代比例:1:4-1:7
        凍存: 按傳代的方法將細(xì)胞消化下來(lái),制成細(xì)胞懸液。 以1000 rpm,離心5 min,棄上清,逐滴加入已經(jīng)預(yù)冷的凍存液,懸浮細(xì)胞。 按每支存管內(nèi)加入500 ml細(xì)胞懸液分裝到凍存管內(nèi),標(biāo)記細(xì)胞名稱、代數(shù)、凍存日期等基本信息。 將凍存管置于程序降溫盒內(nèi),-80℃過(guò)夜,轉(zhuǎn)入液氮。凍存液配方:小鼠胚胎干細(xì)胞*培養(yǎng)液或小鼠ips*培養(yǎng)液60%,es級(jí)fbs 30%,dmso 10%
        附:小鼠胚胎干細(xì)胞與mef細(xì)胞分離的簡(jiǎn)易方法(差速貼壁法): 培養(yǎng)中的小鼠胚胎干細(xì)胞,按傳代的操作方法將細(xì)胞用胰酶消化并吹打成單細(xì)胞懸液后,加入適量的提前溫育好的小鼠胚胎干細(xì)胞*培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,吹打混勻,細(xì)胞懸液分裝到無(wú)mef細(xì)胞的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶(一般地,一個(gè)t25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的小鼠胚胎干細(xì)胞,在一個(gè)10 cm培養(yǎng)皿中進(jìn)行差速貼壁。不要事先鋪明膠,如鋪明膠則細(xì)胞貼壁速度過(guò)快無(wú)法有效分離小鼠胚胎干細(xì)胞與mef細(xì)胞)中。 培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶置于37°c培養(yǎng)箱內(nèi)靜置1小時(shí)。 1小時(shí)后,絕大部分mef細(xì)胞已貼在培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶底面,而大部分小鼠胚胎干細(xì)胞仍然懸浮在培養(yǎng)液中。 收取培養(yǎng)液,進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
        小鼠胚胎干細(xì)胞(mes細(xì)胞)、小鼠ips無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)protocol
        復(fù)蘇: 在t25培養(yǎng)瓶中加入0.2%明膠,搖勻后覆蓋底面即可,于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱至少放置15 min以上。 吸除0.2%明膠,加入事先水浴加熱至37℃的小鼠胚胎干細(xì)胞、小鼠ips細(xì)胞培養(yǎng)液5 ml。 將小鼠胚胎干細(xì)胞、小鼠ips細(xì)胞凍存管從液氮中取出,置于37℃水浴中使之迅速融解,取出后拿到超凈臺(tái)內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋口處及外壁,防止污染。 將凍存管內(nèi)細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含3-4 ml小鼠胚胎干細(xì)胞、小鼠ips細(xì)胞培養(yǎng)液的15 ml離心管內(nèi),以1000 rpm,離心5 min。 離心后將上清液吸除,另加入新鮮的小鼠胚胎干細(xì)胞、小鼠ips細(xì)胞培養(yǎng)液2 ml,吹打懸浮。 重復(fù)吹打,制成單細(xì)胞懸液,盡量避免氣泡。 轉(zhuǎn)移至1個(gè)已經(jīng)包被過(guò)明膠的t25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。 每天更換小鼠胚胎干細(xì)胞、小鼠ips細(xì)胞培養(yǎng)液。傳代:
        一般在復(fù)蘇后第2-3天傳代,視克隆大小和密度而定。 吸除廢液。 用pbs(不含鈣鎂離子)輕輕沖洗一遍。 加入1.0 ml的0.25%胰酶(含edta)至培養(yǎng)瓶,輕輕晃動(dòng),使胰酶覆蓋底面,置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)消化細(xì)胞。 在顯微鏡下觀察,直至細(xì)胞層全部脫落(一般需要1-2 min)。 加2 ml小鼠胚胎干細(xì)胞、小鼠ips細(xì)胞培養(yǎng)液終止消化。 多次輕輕吹打細(xì)胞,制成單細(xì)胞懸液。 加入足量的小鼠胚胎干細(xì)胞、小鼠ips細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打混勻,細(xì)胞懸液分裝到預(yù)先包被過(guò)0.2%明膠的t25培養(yǎng)瓶中。一般地,一個(gè)t25培養(yǎng)瓶中加入5-6 ml培養(yǎng)液。 放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。 每天換液。傳代比例:1:4-1:7
        凍存:
        按傳代的方法將細(xì)胞消化下來(lái),制成細(xì)胞懸液。 以1000 rpm,離心5 min,棄上清,逐滴加入已經(jīng)預(yù)冷的凍存液,懸浮細(xì)胞。 按每支存管內(nèi)加入500 ml細(xì)胞懸液分裝到凍存管內(nèi),標(biāo)記細(xì)胞名稱、代數(shù)、凍存日期等基本信息。 將凍存管置于程序降溫盒內(nèi),-80℃過(guò)夜,轉(zhuǎn)入液氮。凍存液配方:小鼠胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠ips培養(yǎng)液80%,es級(jí)fbs 10%,dmso 10%
        上一個(gè):大件物流收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)價(jià)格表2022
        下一個(gè):國(guó)內(nèi)巖土錨固領(lǐng)域發(fā)展的幾個(gè)關(guān)鍵問題分析

        小型氣象站解決方案-一款用來(lái)監(jiān)測(cè)災(zāi)害天氣發(fā)生的小型氣象站
        不銹鋼燃?xì)鉁p壓閥
        2023年旗艦手機(jī)(2020年手機(jī)推薦)
        COD快速測(cè)定儀含氯高的水樣測(cè)定方法
        次氯酸鈉發(fā)生器進(jìn)口,哪些比較好?
        地區(qū)選擇使用ZW20-12FG/630戶外智能分界開關(guān)廠家
        蘋果11手機(jī)防水嗎掉水里了怎么辦1分鐘有影響(蘋果11手機(jī)防水嗎掉水里)
        小區(qū)污水流量計(jì)的原理特點(diǎn)及安裝注意事項(xiàng)
        如何提高光譜儀的分辨率?
        牡丹修剪方法