1.選擇一根適合的色譜柱，常為c18柱。
2.準(zhǔn)備流動相時僅使用hplc級別的水和色譜級試劑；
3.選擇能給出最佳分離度的流動相成分和濃度。
4.如果樣品中有非離子化物質(zhì)，在嘗試離子化分離之前首先優(yōu)化分離情況。
5.選擇合適的離子對系列試劑以提供相應(yīng)的離子配對：對于酸性分析物使用酸性離子對試劑；對于堿性分析物使用堿性離子對試劑。
6.通過比較選擇所得分離度較好的離子對試劑。
7.一旦離子對試劑已經(jīng)確定，調(diào)節(jié)流動相的ph值將分離度較大化；因為微小的ph值改變對保留性質(zhì)和選擇性都有較大的影響，所以仔細(xì)小心的小幅度調(diào)節(jié)ph值。
8.理想狀況下，流動相中的離子對試劑濃度應(yīng)為0.005m，但是稍微增加離子對試劑可能會稍微增加保留性質(zhì)并因此優(yōu)化分離情況。