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        測定人血漿中25-OH-VD2 和 25-OH-VD3含量的檢測方法

        發(fā)布時間:2024-06-06
        說起補鈣,營養(yǎng)專家認(rèn)為:生*、孕期、更年期、老年期要補 ,鈣的補充是一種常態(tài),而且會貫穿人一生。每個人都需要補鈣,但是大部分時候,我們只需通過日常飲食就可以獲取所需的鈣元素。而那些真正需要額外補充鈣劑的,多是處于青春期、孕期、更年期、老年期這些階段的人群。
        鈣能不能吸收和*是否缺乏有關(guān)
        我們補鈣的目的是為了骨骼的健康,從口服鈣到沉積在骨骼上的幾個環(huán)節(jié)都需要*參加。*是骨骼健康的重要指標(biāo),主要功能是維持人體內(nèi)鈣的代謝平衡以及骨骼形成。研究表明*缺乏會引起一系列疾病,與人體免疫功能異常、心血管疾病、代謝性疾病、自身免疫性疾病、腫瘤等密切相關(guān)。由于公眾增加關(guān)注*缺乏對于身體健康的影響,在過去的幾年內(nèi),樣品數(shù)量檢測大大增加。
        * (vitamin d) 是類固醇的衍生物,又可分為*2(麥角鈣化醇)和*3(膽鈣化醇)。*2體內(nèi)無法產(chǎn)生,來自于飲食攝取,多含于植物性食物中,它是由植物的麥角固醇經(jīng)陽光照射而合成的。人體皮下儲存有從*生成的7-脫氫*,受紫外線的照射后,可轉(zhuǎn)變?yōu)?3,也可從強化奶或其他肉類食物中獲得。
        所以臨床對25-羥*的濃度監(jiān)測具有非常重要的意義,評估*營養(yǎng)狀態(tài),協(xié)助對高鈣血癥、骨質(zhì)疏松癥、佝僂病、甲狀旁腺亢進和25羥化缺陷等疾病的臨床診斷,指導(dǎo)臨床醫(yī)生對心血管疾病、自身免疫病、糖尿病和某些藥物的治療與補充。
        多數(shù)學(xué)者認(rèn)為,人體血中25-羥*營養(yǎng)判斷標(biāo)準(zhǔn)如下:
        目前常用的檢測25-羥*含量的方法有競爭性蛋白結(jié)合法(cpba)、放射免疫法(ria)、酶聯(lián)免疫吸附法(elisa)、化學(xué)發(fā)光免疫測定法(clia)、液相色譜法(hplc)等。這些方法大部分耗時、步驟冗雜,無法滿足臨床簡便、高通量的要求;并且血液中 *濃度太低,檢測限達不到要求。
        這次我們?nèi)耘f使用明星產(chǎn)品sola hrp對血漿樣品進行預(yù)處理,使用syncronis c18色譜柱保留分離vd,建立了測定人血漿中25-oh-vd2 和 25-oh-vd3含量的檢測方法。
        前處理步驟:
        10mg 2ml sola hrp 96 孔板
        (pn:60309-001)
        活化
        500℃甲醇,500μl 含2% 甲酸的水
        上樣
        200μl 血漿
        清洗
        200μl 含水/ 甲醇(60:40)
        洗脫
        200μl 甲醇2 次
        40℃氮氣吹干后用水:
        乙腈定容到100μl
        lc方法:
        色譜柱:
        syncronis c18 1.7μm 50×2.1 mm
        (pn:97102-052130)
        流動相:
        a: 水+0.1% 甲酸
        b: 乙睛+0.1% 甲酸
        梯度方法:
        2min 內(nèi),70-100%b
        流速:0.8ml/min
        柱溫:40℃
        進樣量:50μl
        靈敏度:
        loq 5ng/ml
        線性范圍:
        血漿中25- 羥基vit d2 和25- 羥基vit d3在5 -1000ng/ml 濃度范圍成線性,r2=0.9968 和0.9981
        回收率結(jié)果:
        血漿樣品添加25-oh vit d2 和25-oh vit d3 的回收率>94%,rsd<4.0%。
        體內(nèi)*濃度的準(zhǔn)確定量是診斷*缺乏相關(guān)疾病診斷和治療反饋效果的重要指標(biāo)。采用sola hrp對樣品進行預(yù)處理,syncronis c18液相色譜柱保留,所得25-oh-vd2 和 25-oh-vd3的loq、標(biāo)準(zhǔn)曲線、回收率均符合臨床檢測要求,具有非常高的靈敏度、特異性和準(zhǔn)確性,適用于血漿基質(zhì)中*臨床樣本的快速檢測。
        后小編啰嗦一句,體內(nèi)*的水平,決定每個人補充*的利弊。我們不*沒有任何理由地普遍補充*。
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