莢膜阿耶羅菌探針法熒光定量pcr試劑盒實(shí)驗(yàn)操作:
1. 模板制備（樣本制備區(qū)）
建議使用配套水生動物病害基因組 dna/rna 提取試劑盒系列產(chǎn)品，具體過程詳見產(chǎn)品說明書。
2．添加模板（模板添加區(qū)，放置于冰盒中進(jìn)行）
請于-20℃條件下保存，有效期 12 個月
取出所需測試數(shù)的已含有反應(yīng)液 a-tsv-i 的 pcr 管，將試劑*解凍，離心 30 秒，在管蓋上標(biāo)記管名（陰性對照管 ng、樣品 xx、陽性對照管 pg）。打開管蓋向各管管底分別加入 0.8μl b-i 及 0.2μl r-i，蓋上陰性對照管管蓋，其他各管分別沿管壁加入 2μl 模板，順序?yàn)榇郎y樣品模板、pg-tsv-i，依次蓋好各管管蓋，離心 30 秒，立即進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。
3. 擴(kuò)增反應(yīng)（擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)）
①恒溫儀器 63℃條件下反應(yīng) 60 min。待儀器升溫至 63℃后，新建程序，設(shè)置實(shí)驗(yàn)名稱及反應(yīng)時間，將步驟 2中離心后的 pcr 反應(yīng)管放入恒溫?zé)晒夥肿訖z測儀，點(diǎn)擊開始檢測。
②若使用熒光定量 pcr 儀，則熒光基團(tuán)選擇 fam，淬滅基團(tuán)選擇 none，將 63℃ 15 s，63℃ 45 s 作為一個循環(huán)，于 63℃ 45 s 處收集熒光信號，60 個循環(huán)。