土壤堿性磷酸酶 (s-akp/alp) 活性檢測試劑盒說明書
注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
規(guī)格：100t/96s
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體 42ml×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。用前加 100ml蒸餾水充分溶解。
試劑三：液體 2.5ml×1 瓶，4℃保存。
試劑四：粉劑×1 支，4℃避光保存。臨用前加 576µl無水乙醇 (自備) ，24µl蒸餾水充分溶解。(變褐色后不能再使用)
標準品：液體 1ml×1 支，0.5 µmol/ml苯酚標準液，4℃保存。
產(chǎn)品說明：
土壤磷酸酶是一類催化土壤有機磷礦化的酶，其活性的高低直接影響著土壤中有機磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性，是評價土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強度的指標。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有 效磷含量和 ph顯著影響，根據(jù)最適 ph范圍，通常分為酸性、中性和堿性三種類型。
堿性環(huán)境中，s-akp/alp催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉，通過測定酚的生成量即可計算出 s-akp/alp活性。
試驗中所需的儀器和試劑：
分光光度計/酶標儀、微量比色皿/96 孔板、臺式離心機、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、蒸餾水、乙醇和甲苯。
操作步驟：
一、粗酶液提?。?br>稱取風干混勻土壤約 0. 1g，加入 0.05ml甲苯 (自備) ，輕搖 15min；加 0.4 ml試劑一并且搖 勻后，置于 37℃恒溫培養(yǎng)箱，開始計時，催化反應 24h；到時后迅速加入 1ml試劑二充分混勻，以終止酶催化的反應。10000rpm室溫離心 10min，取上清液置于冰上待測。
二、測定步驟：
(1) 分光光度計/酶標儀預熱 30 min以上，調(diào)節(jié)波長到 660 nm，蒸餾水調(diào)零。
(2) 空白管：取微量比色皿/酶標板，加入 10 µl試劑一，20 µl試劑三，4 µl試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水 166µl，混勻后室溫靜置 30 min，于 660 nm 測定吸光度，記為 a 空白管。
(3) 標準管：取微量比色皿/酶標板，加入 10 µl標準液，20 µl試劑三，4 µl試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水 166µl，混勻后室溫靜置 30 min，于 660 nm 測定吸光度，記為 a 標準管。
(4) 測定管：取微量比色皿/酶標板，加入 10 µl上清液，20 µl試劑三，4 µl試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水 166µl，混勻后室溫靜置 30 min，于 660 nm 測定吸光度，記為 a 測定管。 注意：空白管和標準管只需要測定一次。
s-akp/alp活性計算：
活性單位定義：37℃中每克土壤每天釋放 1nmol酚為 1 個酶活單位。
s-akp/alp( nmol/d/g) =[c標準液 ×(a測定管－ a空白管)÷(a標準管－ a空白管)]×v總
÷w÷t×1000
=725×(a測定管－a空白管)÷(a標準管－a空白管)÷w
c標準液：0.5 µmol/ml； v總：催化體系總體積，1.45ml；w：土壤樣品質(zhì)量，g；t：催化反應時間，24 h=1 d；1000：單位換算系數(shù)，1µmol=1000nmol。
注：線性范圍為 0.03125µmol/ml-2.5µmol/ml
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