酶標(biāo)儀檢測(cè)單位光通過(guò)被檢測(cè)物,前后的能量差異即是被檢測(cè)物吸收掉的能量,特定波長(zhǎng)下,同一種被檢測(cè)物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。
檢測(cè)單位用od值表示, od是optical density(光密度)的縮寫(xiě),表示被檢測(cè)物吸收掉的光密度, od=1og(1/trans),其中trans為檢測(cè)物的透光值。根據(jù)bouger-ambert-beer法則,od值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系:e=od=logι0/ι 其中e表示被吸收的光密度, ι0 為在檢測(cè)物之前的光強(qiáng)度,ι為從被檢測(cè)物出來(lái)的光強(qiáng)度。
od值由下述公式計(jì)算:e=od=c×d×ec為檢測(cè)物的濃度 d為檢測(cè)物的厚度 e為摩爾因子在特定波長(zhǎng)下測(cè)定每一種物質(zhì)都有其特定的波長(zhǎng),在此波長(zhǎng)下,此物質(zhì)能夠吸收zui多的光能量。如果選擇其它的波長(zhǎng)段,就會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此,在測(cè)定檢測(cè)物時(shí),我們選擇特定的波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè),稱為測(cè)量波長(zhǎng)。
但是每一種物質(zhì)對(duì)光能量還存在一定的非特異性吸收,為了消除這種非特異性吸收,我們?cè)龠x取一個(gè)參照波長(zhǎng),以消除這個(gè)不準(zhǔn)確性。在參照波長(zhǎng)下,檢測(cè)物光的吸收zui小。檢測(cè)波長(zhǎng)和參照波長(zhǎng)的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
酶標(biāo)儀結(jié)構(gòu)規(guī)格有40孔板,55孔板,96孔板等多種,不同的儀器選用不同規(guī)格的孔板,對(duì)其可進(jìn)行一孔一孔地檢測(cè)或一排一排地檢測(cè).
酶標(biāo)儀所用的單色光既可通過(guò)相干濾光片來(lái)獲得,也可用分光光度計(jì)相同的單色器來(lái)得到.在使用濾光片作濾波裝置時(shí)與普通比色計(jì)一樣,濾光片即可放在微孔板的前面,也可放在微孔板的后面,聚光鏡,光欄后到達(dá)反射鏡,經(jīng)反射鏡作90°反射后垂直通過(guò)比色溶液,然后再經(jīng)濾光片送到光電管.
從酶標(biāo)儀工作框圖和光路圖上可看出,它和普通的光電比色計(jì)有以下幾點(diǎn)差異:(l)盛裝待測(cè)比色液的容器不再使用比色皿,而是使用塑料微孔板.微孔板常用透明的聚乙烯材料制成,對(duì)抗原抗體有較強(qiáng)的吸附作用,故用它作為固相載體.
⑵由于盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過(guò),因此酶標(biāo)儀的光束都是垂直通過(guò)待測(cè)溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過(guò)比色液. 酶標(biāo)儀分為:多功能酶標(biāo)儀和進(jìn)口酶標(biāo)儀以及全自動(dòng)酶標(biāo)儀。
⑶酶標(biāo)儀通常不僅用a,有時(shí)也使用光密度od來(lái)表示吸光度.酶標(biāo)儀可分為單通道和多通道2種類型,單通道又有自動(dòng)和手動(dòng)2種之分.自動(dòng)型的儀器有x,y方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu),可將微孔板l的小孔一個(gè)個(gè)依次送入光束下面測(cè)試,手動(dòng)型則靠手工移動(dòng)微孔板來(lái)進(jìn)行測(cè)量.
在單通道酶標(biāo)儀的基礎(chǔ)上又發(fā)展了多通道酶標(biāo)儀,此類酶標(biāo)儀一般都是自動(dòng)化型的.它沒(méi)有多個(gè)光束和多個(gè)光電檢測(cè)器,如 12個(gè)通道的儀器設(shè)有 12條光束或 12個(gè)光源,12個(gè)檢測(cè)器和12個(gè)放大器,在x方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)裝置的作用下,樣品12個(gè)為一排被檢測(cè).多通道酶標(biāo)儀的檢測(cè)速度快,但其結(jié)構(gòu)較復(fù)雜價(jià)格也較高.
摘自《陜西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)》1998.13⑷12摘要 為提高酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果的室內(nèi)重復(fù)性和增強(qiáng)室間可比性,對(duì)已建立的酶標(biāo)儀性能評(píng)價(jià)與鑒定的基該方法進(jìn)行了詳細(xì)解釋和補(bǔ)充,以供同行在評(píng)價(jià)、鑒定儀器時(shí)參考與應(yīng)用。