你們細(xì)胞是怎么凍存的?求解!!!我的是4度冰箱放半小時(shí),-20度冰箱半小時(shí),然后轉(zhuǎn)移到-80度冰箱!但是放在-80度冰箱1個(gè)月后,細(xì)胞復(fù)蘇就感覺狀態(tài)不太好了!!
做實(shí)驗(yàn)前要先學(xué)會(huì)凍存，以備自己在后面的實(shí)驗(yàn)中能保持同一來源、穩(wěn)定可靠的細(xì)胞，且可減少污染或其它不利影響。
影響凍存細(xì)胞活性的因素
1、細(xì)胞凍存保護(hù)劑：常用的有二甲基亞砜（dmso）和甘油，常用的濃度為5%-10%（90%小牛血清）。dmso對二倍體細(xì)胞的毒性較甘油小。
2、細(xì)胞懸液的凍結(jié)速度：慢凍時(shí)冰凍在細(xì)胞外形成，因此不致?lián)p害細(xì)胞。多數(shù)細(xì)胞以每分鐘下降1℃的速度，降至-20℃凍結(jié)。均可獲得滿意效果。
3、保存溫度：液氮罐，可達(dá)到-196℃，此時(shí)所有的物理化學(xué)活動(dòng)均降至zui低限度，以保證細(xì)胞長期保存。
4、復(fù)蘇：急速融化復(fù)蘇可防止損害細(xì)胞。凍結(jié)細(xì)胞從液氮中取出后，應(yīng)立即放入37℃~43℃的水浴中，30秒至一分鐘內(nèi)融化。