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        百合的組織培養(yǎng)

        發(fā)布時(shí)間:2024-05-31
        百合是百合科屬多年生草本鱗莖植物,是世界著名的觀賞花卉。全世界的本屬植物約有94種,主要分布在北半球的溫帶和寒帶地區(qū),少數(shù)種類分布在熱帶高海拔地區(qū)。中國(guó)是百合屬植物分布最多的國(guó)家,也是世界百合起源的中心,據(jù)調(diào)查約有47種18個(gè)變種,占世界百合總數(shù)的一半以上,其中有36種15個(gè)變種為中國(guó)特有種。隨著我國(guó)花卉產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展20世紀(jì)80年代后期大量?jī)?yōu)良的觀賞百合栽培品種陸續(xù)從荷蘭等國(guó)引進(jìn)我國(guó)?,F(xiàn)已得到廣泛栽培,成為我國(guó)花卉市場(chǎng)中的重要高檔切花種類。
        關(guān)于百合的組織培養(yǎng),國(guó)內(nèi)外不少研究者開展了大量的工作。在優(yōu)良品種快速繁殖、品種脫毒復(fù)壯、新品種培育以及種質(zhì)資源保存等方面,具有較為成熟的技術(shù)。
        百合植株的不同部分均采用組織培養(yǎng)的方法,繁殖出新個(gè)體并進(jìn)行快速擴(kuò)繁。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì),國(guó)內(nèi)外組織培養(yǎng)成功的百合種及品種已超過幾百種。最早是dobreaux等人(1950)首次用純白百合(liliumcandidum)的花蕾成功地誘導(dǎo)出小鱗莖。隨后robb(1957)成功地進(jìn)行了2個(gè)種百合鱗片的培養(yǎng)結(jié)果如下。
        鱗片腹軸面上、中、下三部分形成小鱗莖的百分率分別為0、3.8%及71.3%。春秋季鱗片形成子球率分別為77%及53%,夏季為2%,冬季為0。
        henser(1976)培養(yǎng)蘭州百合(l.davidiivar.unicolor)的花柱和花梗,通過愈傷組織途徑得到試管小鱗莖。
        黃濟(jì)明(1979~1984)對(duì)25個(gè)種或品種進(jìn)行了組培試驗(yàn),證明百合的珠芽、鱗片、鱗莖盤、根、莖、葉、莖尖、花梗、花柱和未成熟胚等外植體均能被促進(jìn)形態(tài)發(fā)生。新美芳二(1980)對(duì)百合鱗片、花被片、花絲、花柄等也組培成功,認(rèn)為開花時(shí)各花器官和莖所形成小鱗莖的能力最高。相增海(1983)用4個(gè)種的百合鱗片、莖段進(jìn)行培養(yǎng)證實(shí)。
        種間分化率存在明顯差異。取處于休眠期的外植體進(jìn)行培養(yǎng),其分化能力下降。
        程治英等人(1991~2001)對(duì)30多種或品種的百合進(jìn)行組培證實(shí)的結(jié)果如下:
        (1)用百合根、葉作為外植體,也與鱗片一樣,不同部位分化叢芽的能力都是近軸端大于遠(yuǎn)軸端。
        (2)鱗莖鱗片分化能力(分化苗的頻率和速度)都是外部大于內(nèi)部。
        雜種品種的分化能力大于野生種,低海拔種大于高海拔種。鱗片組培得到小鱗莖的試管鱗片其分化能力大于原始培養(yǎng)鱗片的分化能力。
        王愛勤(1998)比較了9個(gè)品種分化小鱗莖的差異,結(jié)果表明不同品種的分化能力有明顯的不同,顯著高的達(dá)86%,低的僅13%。趙祥云(2000)等人報(bào)道:由花梗或花柱培養(yǎng)的小苗,雖然其鱗莖的培養(yǎng)途徑一樣,但從移栽到開花的時(shí)間可大大縮短,如麝香百合雜種系花柱培養(yǎng)的試管苗從移栽到開花只需半年多時(shí)間。李寶平等人(1992)對(duì)平陸百合(l.davidiivar.umicolor)組培中發(fā)生小鱗莖的條件及人工種皮包埋效果進(jìn)行了觀察和分析。他認(rèn)為百合鱗莖既是儲(chǔ)藏器官又是無性繁殖器官。從植株的整體結(jié)構(gòu)看,它位于中間偏下部位。從遺傳勢(shì)的角度出發(fā),鱗片中偏下部位發(fā)生小鱗莖應(yīng)有的較強(qiáng)遺傳勢(shì),組培中小鱗莖發(fā)生的能力最強(qiáng),這既符合生物的遺傳優(yōu)勢(shì)理論,又符合組培實(shí)際情況。屈云慧等人近期對(duì)從國(guó)外引進(jìn)的100余個(gè)百合品種進(jìn)行了組培研究及快繁生產(chǎn),在短期內(nèi)獲得了大量的組培種苗。
        有效的培養(yǎng)方法
        1、培養(yǎng)基配方
        誘導(dǎo)培養(yǎng)基:ms+ba1.0mg/l+naa0.1mg/l
        增殖培養(yǎng)基:ms+ba0.5mg/l+naa0.5mg/l
        生根培養(yǎng)基:1/2ms+naa0.1mg/l
        2、培養(yǎng)程序
        取材及滅菌優(yōu)選生長(zhǎng)健壯、開花性狀好的種球作為外植體。在取材前,最好將準(zhǔn)備接種的鱗莖在4~5℃的低溫下處理6~8周,然后經(jīng)洗衣粉常規(guī)清洗后,剝?nèi)[莖外皮及外部2~3層鱗片,切去少許頂部及基部,先用75%的酒精浸泡30~60s,然后在0.1%升汞溶液中處理15~20分鐘,次氯酸鈉處理10~15分鐘,無菌水洗3~4次,即可進(jìn)行無菌操作切塊(段)接種。花器官等培養(yǎng)時(shí),常取未開放的花蕾,消毒后切開,取其內(nèi)部器官接種。生長(zhǎng)及分化鱗莖切塊經(jīng)20天后,切口便產(chǎn)生白色的小鱗莖突起,這時(shí)可將其切成數(shù)塊進(jìn)行繼代培養(yǎng)。在增殖培養(yǎng)基中小鱗莖有所增殖,并抽出葉片,成為幼苗,將其轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中,10天左右便可有根形成。此時(shí)即可出瓶移栽。在高naa低ba的培養(yǎng)基中,通過鱗片培養(yǎng)可一次形成完整植株,但幼苗根部有腫脹現(xiàn)象。相反,在高ba和低naa時(shí),能形成大量的小鱗莖狀突起,從中分化出大量的芽,但無根的分化。趙祥云(1996)提出培養(yǎng)基ms+naa0.03mg/l能夠促進(jìn)百合鱗莖的發(fā)育,說明生長(zhǎng)素在誘導(dǎo)百合生根的同時(shí)也促進(jìn)鱗莖的發(fā)育;ms+ba0.03mg/l+naa0.03mg/l對(duì)百合鱗莖的生長(zhǎng)有利,而naa與ba配合使用時(shí)naa/ba的比值小則有利于百合鱗莖的形成。同時(shí),溫度對(duì)組培小鱗莖的生長(zhǎng)極為重要。百合組培苗生長(zhǎng)的最適溫度為18~22℃,隨溫度升高或降低則生長(zhǎng)狀況不佳。另外對(duì)百合組培苗進(jìn)行暗處理也有利于誘導(dǎo)百合鱗莖的形成。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及調(diào)控技術(shù)
        利用組培技術(shù)快速繁殖百合,除要求具有較高的繁殖系數(shù)、芽形成根的時(shí)間短和過渡移栽有較高的成活率外,更重要的是新生的子代都必須與母體保持一致的物理、化學(xué)和遺傳特征。涉及組培遺傳穩(wěn)定性的研究者sheridan(1975)認(rèn)為鐵炮百合愈傷組織培養(yǎng)6年后,其染色體數(shù)和再生能力無變化。ahloowalia(1978)認(rèn)為百合愈傷組織經(jīng)長(zhǎng)期培養(yǎng)后,其染色體數(shù)目、葉形和大小、花的發(fā)育、生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)、成活率、多年生性狀等都有所變化,但這些變化不能有性傳遞。stimart(1980)也指出百合愈傷組織經(jīng)長(zhǎng)期循環(huán)培養(yǎng),植株活力、葉斑等發(fā)生變化,但改變的特征不能有性傳遞。細(xì)木高志(1981)認(rèn)為百合科植物在栽培中染色體是不穩(wěn)定的,但直接從外植體再生的植株就不會(huì)發(fā)生此類情況。景忠平(1989)報(bào)道,鐵炮百合葉、花被、花枝和子房等外植體培養(yǎng)3年,其分化能力不下降。李耿光等(1983)培養(yǎng)百合莖段,通過愈傷組織途徑進(jìn)行繁殖,培養(yǎng)8代后其分化能力就已下降,但這種結(jié)果的形成可能是在組織培養(yǎng)過程中使用激素不當(dāng)所致(報(bào)道中他所用kt含量為10mg/l)。
        關(guān)于百合組培的實(shí)用化研究,國(guó)內(nèi)外不少研究者為此做出了貢獻(xiàn)。takayma等(1980)研究了百合鱗片組培形成小鱗莖的過程,考察了鱗片生理年齡、活性炭、糖濃度等對(duì)培養(yǎng)效果的影響。1982年,他又采用固體和液體培養(yǎng)基結(jié)合連續(xù)光照等措施,達(dá)到了快繁大量小鱗莖的目的。新美芳二(1985)研究了光(0、8、16、24h)和溫度(20~30℃)對(duì)鱗片分化小鱗莖的影響。scaramazz等(1988)提出經(jīng)4℃低溫處理4~6周的小鱗片,可提前12~20d分化小鱗莖,并指出采用定期供氧和營(yíng)養(yǎng)液的生物反應(yīng)裝置來生產(chǎn)小鱗莖是可行的。唐世富等人(1988~1991)、劉選明等人(1996~1998)通過abt等新型添加劑在百合組織培養(yǎng)中的應(yīng)用,探討了組培條件的優(yōu)化等。溫春秋秀等(1997)在進(jìn)行新鐵炮百合的培養(yǎng)中,用微生物多糖固化劑gellangum2g/l代替瓊脂,節(jié)約了組培成本。王愛勤(1998)指出糖濃度為10%和添加10mg/l的多效唑(pp333)可促進(jìn)小鱗莖的生長(zhǎng)。
        另外還有許多對(duì)試管鱗莖休眠現(xiàn)象做了闡述:如鐵炮百合30℃下的小鱗莖不休眠,而25℃下的絕大部分鱗莖休眠;低鹽低糖和高氮培養(yǎng)基上的小鱗莖不休眠,而高糖(9%)培養(yǎng)基上的小鱗莖會(huì)出現(xiàn)休眠現(xiàn)象。不同的品種在3~6℃的溫度下39~120d可打破休眠。一般亞洲百合所需時(shí)間短(約30天),而東方百合所需時(shí)間長(zhǎng)(約2~3個(gè)月)。休眠現(xiàn)象還與培養(yǎng)小鱗莖時(shí)所用的糖濃度有關(guān)(takayama等1982);3%糖濃度培養(yǎng)下得到的小鱗莖在5℃下約2個(gè)月可打破休眠,而9%糖濃度下培養(yǎng)得到的小鱗莖要冷藏約4個(gè)月。我們?cè)谂囵B(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn),蔗糖濃度較高(40g/l)對(duì)小鱗莖的形成和長(zhǎng)大有利。如糖濃度降到20g/l,小鱗莖很快能長(zhǎng)成幼苗。因此,可用糖濃度控制小鱗莖的生長(zhǎng),使幼苗生長(zhǎng)健壯,提高成活率。也有人在組培前用4℃的低溫處理鱗片120d,在經(jīng)組培所得到的小鱗莖不發(fā)生休眠現(xiàn)象。
        試管苗或試管小鱗莖在栽培中的開花時(shí)間也因種而異,如外引雜交品種和新鐵炮百合當(dāng)年可開花,而毛百合、川百合和透百合等要15~24個(gè)月開花,蘭州百合需3~4年才開花。
        出瓶苗的過渡移栽利用種子發(fā)芽箱進(jìn)行百合組培苗過渡培養(yǎng),可使移栽苗容易適應(yīng)外界環(huán)境條件。當(dāng)移栽苗放入種子發(fā)芽箱時(shí),通過提高溫度和濕度,使環(huán)境接近培養(yǎng)瓶的環(huán)境。3~4天后將覆蓋物稍敞開,使溫度和濕度降低,為移栽苗進(jìn)一步適應(yīng)外界環(huán)境創(chuàng)造條件。根長(zhǎng)范圍在0~1.0cm之間的幼苗,適應(yīng)性強(qiáng),生長(zhǎng)快,生命力旺盛,適應(yīng)性短,根系的生長(zhǎng)量大,有利于幼苗的健壯入土;而根系較長(zhǎng)的幼苗剛從瓶?jī)?nèi)出來時(shí)雖長(zhǎng)的很壯,但它的生長(zhǎng)勢(shì)過旺,適應(yīng)力有所降低,抗逆性差,環(huán)境稍不適宜,就易造成根系的損傷或腐爛,從而影響整個(gè)幼苗的生長(zhǎng)。因此,應(yīng)選擇組培幼苗的根系剛剛萌生正要生長(zhǎng)的時(shí)期進(jìn)行移植。過渡培養(yǎng)的前7天內(nèi),在1/4倍濃度培養(yǎng)液的條件下,幼苗的生長(zhǎng)量最大;在7~15天的一段時(shí)間內(nèi),在1/3倍濃度培養(yǎng)液的條件下幼苗的生長(zhǎng)量最大;而移植入土后,在1/2倍濃度培養(yǎng)液的條件下幼苗的生長(zhǎng)最為迅速。移栽的基質(zhì)也很重要,必須具有良好的土壤結(jié)構(gòu),使土壤疏松,有利于植株的生長(zhǎng)和扎根。試驗(yàn)證明:1/3沙土±1/3草炭+1/3腐殖土是移栽百合組培幼苗較理想的基質(zhì)。
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