毛細管電泳又稱高效毛細管電泳,是一類以毛細管為分離通道、以高壓直流電場為驅(qū)動力的新型液相分離技術(shù)。毛細管電泳儀的主要部件包括直流高壓電源、毛細管、電極和電極槽、沖洗進樣系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等。
一、電流不穩(wěn)定
波動或無電流
可能原因及處理方法:
1、毛細管中形成氣泡,沖洗毛細管,升高電壓以限制初始加熱或?qū)彌_液脫氣。
2、毛細管堵塞,用吸收溶液(如naoh)沖洗毛細管,當觀察200nm的在線信號時,應(yīng)該看到基線上有“臺階”,如果仍然堵著,用注射器或高壓氣體手動沖洗。
3、毛細管斷裂,更換毛細管
4、緩沖液瓶中沒有緩沖液或者裝錯緩沖液,灌裝/改變緩沖液瓶。
5、大體積進樣,正常情況下分析過程中電流應(yīng)該保持穩(wěn)定。
二、基線不穩(wěn)定
1、基線有毛刺
(1)緩沖液沉淀,采用0.2或0.45μm的濾膜過濾緩沖液。
(2)緩沖液中有微小的氣泡,用超聲波或真空對緩沖液進行脫氣。
(3)樣品沉淀驗證樣品組分在緩)中液中有足夠的溶解度。
2、基線噪聲大
(1)毛細管接口中的狹縫堵塞,用甲醇或水清洗狹縫。
(2)氘燈老化,使用dad測試來測定氘燈的光強度和工作時間,若必要就更換新的氘燈。
(3)數(shù)據(jù)采集速率太高,確定峰寬,需要的話降低采集速率
(4)參比波長設(shè)置不合適,分析過程中采集1^光譜圖,在不影響樣品吸收的情況下采用盡可能低的波長,并采用寬的帶寬。
(5)緩沖液在檢測波長有吸收,使用uv吸收低的緩沖液,如磷酸鹽和硼酸鹽特別是在低于210nm檢測時。
3、基線飄移
(1)毛細管準直定位不合適,重新在檢測器塊中安裝毛細管卡套。
(2)溫度未平衡,打開頂蓋之后要有10-20分鐘的平衡時間。
(3)氘燈剛剛開啟,開啟氘燈后要有15-30分鐘的平衡時間。
三、分離效率差
1、寬色譜峰
(1)樣品超載,降低樣品濃度或進樣量。
(2)過量的焦耳熱,降低電壓、緩沖液電導(dǎo)或毛細管內(nèi)徑。
2、變形的色譜峰
(1)樣品和緩沖液的離子淌度不匹配,調(diào)節(jié)淌度或增大緩沖液和樣品的電導(dǎo)差異。
(2)樣品超載,降低樣品濃度或進樣量。
3、峰拖尾
樣品吸附到毛細管壁,使用聚合物添加劑或涂層毛細管。