一、透析
透析就是利用小分子能夠通過,而大分子不能夠通過半透膜的原理,將大小分子量物質(zhì)分開的一種實驗手段;在膜兩側(cè)存在濃度差時,溶質(zhì)從高濃度的一側(cè)(通常是樣品置于透析袋中)擴散通過半透膜到低濃度的一側(cè)(透析溶液一側(cè))直至膜兩邊濃度達到平衡。如下圖所示:
利用透析分離物質(zhì)的優(yōu)缺點:
優(yōu)點:樣品回收率高;操作簡單,無需繁瑣準(zhǔn)備工作;成本低廉,可一次性使用;分離條件溫和;無需監(jiān)控
缺點:耗時較長(24-48小時);要求較為明顯的樣品和雜質(zhì)之間的分子量差(1-2個數(shù)量級)。
二、三種不同類型的透析袋
1、普通型透析袋
(1)把透析袋剪成適當(dāng)長度(10-20cm)的小段;
(2)在大體積的2%(w/v)*和1mmol/l edta(ph 8.0)中將透析袋煮沸10分鐘;
(3)用蒸餾水*清洗透析袋;
(4)放在1mmol/l edta(ph 8.0)中將之煮沸10分鐘;
(5)冷卻后,存放于4度,必須確保透析袋始終浸沒在溶液內(nèi)。從此時起取用透析袋是必須戴手套;
(6)用前在透析袋內(nèi)裝滿水然后排出,將之清洗干凈;
2.再生纖維素透析袋:
此類型透析袋可耐受ph范圍是2.0-12.0;耐受溫度是4-60℃;不能煮,也不需要煮,只需用純水*沖洗即可。
3.纖維素透析袋:
此類型透析袋可耐受ph范圍是2.0-9.0;耐受溫度是4-37℃;不能煮,也不需要煮,只需用純水*沖洗即可。
三、透析袋的選擇
1.確定透析袋的分子量
在選擇適合截留分子量之前,首先要明確:欲保留在透析袋中的樣品和想要除去的雜質(zhì)的分子量。
2.選擇普通型,再生型,or纖維素透析袋
確定好分子量之后,根據(jù)實際情況,樣品溶劑等,選擇透析袋
3.正確選擇扁平寬度
透析袋扁平寬度的選擇取決于樣品體積和透析容量。較小的透析管透析更快;較大的透析管因擴散距離較長透析較慢。為易于使用,建議使用總長(包括閉合夾和頂部空間)為大約10-15cm的透析袋。
四、透析袋的使用
下述透析程序是一個普遍的基礎(chǔ)透析過程。在開始透析之前應(yīng)考慮到許多變數(shù)。透析樣品溶劑、膜的化學(xué)相容性、膜的截留分子量,透析溶劑、透析體積、溫度等變量都會影響透析速率,因此,一些應(yīng)用中下述透析過程可能需要適當(dāng)?shù)淖兓?br>a.把適量的透析液(緩沖液)加入透析裝置。透析液的體積應(yīng)為樣品體積量的100倍。(例如:在一升透析液中透析10毫升的樣品)
b.裁剪適當(dāng)長度的透析管。預(yù)留一段額外長度(約占總樣品體積量的20%)作為頭部空間
c.把透析管插入打開的透析夾,在約超出透析夾3-5毫米的位置再夾住。不要折疊透析袋
d.由透析管開口端將樣品裝入。調(diào)整一下頂部空間的長度,夾緊透析夾
e.把透析樣品放在合適的透析緩沖液中
f.透析要根據(jù)具體的應(yīng)用需求。通常情況下,允許過夜透析。在持續(xù)透析的過程中,至少要進行3次全部更換透析液。建議在(透析后)2-4小時,6-8小時和10-14小時(第2天早晨)更換透析液。在后一次透析液的更換后要至少繼續(xù)進行2小時的透析。
五、使用注意事項
a.透析袋不能在純水中*儲存,會長菌,用0.05%die氮化鈉溶液儲存
b.樣品按*的單位長度容量加樣,不可多加,樣品濃度不可太大,否則容易導(dǎo)致膜漲破
c.樣品和透析液體積比一般是1:50~500
d.對于高濃度污染物,樣品可能需要較長的時間透析,透析液需要更頻繁的更換。
e.透析溫度主要取決于樣品。溫度限制主要取決于膜的類型。纖維素透析袋可以承受的溫度高達37℃,再生纖維素透析袋可以承受的溫度高達60℃。
六、使用注意事項
在適當(dāng)?shù)膬Υ媲闂l件下,保質(zhì)期為兩年。干燥的透析袋要在室溫或4℃儲存在聚yi烯袋中。一旦變濕,透析袋應(yīng)浸泡在下列之一的溶液中:0.05%die氮化鈉,1%苯j(luò)ia酸鈉或1%甲醛。(備注:一旦變潮濕,不要讓透析袋干燥。不斷干燥會造成孔隙結(jié)構(gòu)不可恢復(fù)的倒塌)