細(xì)胞：h1944細(xì)胞
中文名稱：人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
血清：10%fbs（gibco胎牛血清） 培養(yǎng)基：1640培養(yǎng)基
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支氣管炎病毒(aibv)核酸檢測(cè)：rna提取
1:樣品處理
固體組織：取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿或剪刀剪碎，加入500ul rna提取液a（trizol reagents），研磨或振蕩至勻漿狀，轉(zhuǎn)移到1.5ml的ep管中，室溫放置5min。
培養(yǎng)物、試子等液體標(biāo)本：將標(biāo)本充分混勻，取100μ液體標(biāo)本加入500μl rna提取液a（trizol reagents）充分震蕩，室溫放置5min。
2:加入100ul氯仿，用力震蕩15s，室溫靜置5min， 4℃ 13,000rpm離心5min。
3:小心將上層水相轉(zhuǎn)移到干凈離心管中，加300 μl 無水乙醇，另加10ul rna提取液b（內(nèi)含不溶物，使用前室溫溶解并充分混勻），充分混勻，13,000rpm離心1min。
4:棄上清，加入500ul 75%的depc乙醇，充分混勻，13,000rpm離心1min，小心吸去大部分乙醇。
5:將提取管敞口在室溫空氣中干燥5min待乙醇揮發(fā)干凈，用20μl depc h2o溶解沉淀。
陰性質(zhì)控品：取100μl陰性質(zhì)控品加入500μl rna提取液a（trizol reagents）充分震蕩，室溫放置5min。后按2-5操作。
aibv陽性質(zhì)控品: 直接取3μl 進(jìn)行pcr擴(kuò)增。
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請(qǐng)嚴(yán)格遵照無菌操作）
1． 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，pbs 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min）
2． 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)（不建議消化到細(xì)胞漂浮）去掉yi酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3． 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4． 注意培養(yǎng)基 ph 值變化情況，定期換液（每周 2-3 次），待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或者凍存。
關(guān)鍵詞：培養(yǎng)箱