mrna合成的關(guān)鍵步驟之一是將質(zhì)粒dna進行線性化，這一步需要使用限制性內(nèi)切酶，iis型內(nèi)切酶是質(zhì)粒線性化的內(nèi)切酶，因為它們在識別位點下游切割dna，可確保所設計的poly(a)尾的完整性，線性化后的dna模板上不會留下“疤痕”，ivt過程中也不會添加不需要的核苷酸。bsai是常見的iis型內(nèi)切酶之一，在mrna合作中起著重要作用。
圖1. bsai識別位點及切割序列
翌圣gmp級別bsai翌圣的bsai由大腸桿菌重組表達，gmp標準生產(chǎn)，酶切效率高、星號活性低、末端完整性良好，可用于mrna疫苗生產(chǎn)的質(zhì)粒線性化、慢病毒/腺病毒包裝的載體構(gòu)建、質(zhì)粒制備的酶切驗證、golden gate組裝等。
產(chǎn)品特點
1、完成fda dmf備案（備案號：mf038306）2、gmp級別，無動物源成分，嚴格質(zhì)控嚴格按照gmp標準生產(chǎn)，確保無動物源成分引入。核酸酶，蛋白酶、宿主dna/蛋白殘留、支原體、內(nèi)毒素等均嚴格質(zhì)控確保產(chǎn)品質(zhì)量。
3、高酶切效率，低星號活性，末端完整性良好具有高酶切效率，37℃反應16 h無星號活性，經(jīng)酶切—連接—再酶切測試末端完整性良好。
4、性能優(yōu)越，應用端性能媲美競品
部分數(shù)據(jù)展示01無非特異性核酸酶殘留將20 u bsai與底物dna在37℃孵育 1 h和16 h，瓊脂糖凝膠電泳比較dna譜帶變化。結(jié)果顯示翌圣bsai無非特異性核酸酶殘留。
圖2.非特異性核酸酶殘留檢測結(jié)果
02末端完整性良好，與進口品牌效果一致通過“酶切—連接—再酶切”的功能實驗驗證bsai酶切的末端完整性，結(jié)果顯示翌圣的bsai末端完整性良好，與進口品牌效果一致。
圖3. bsai末端完整性檢測結(jié)果
03末端完整性良好，與進口品牌效果一致在37℃下，將bsai及底物dna在酶切反應體系中共同孵育16h，未檢測到星號活性引起的底物非特異性降解，表明翌圣bsai 16 h孵育無星號活性。
圖4. bsai星號活性檢測結(jié)果
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