ce-sds純度檢測試盒產品介紹
產品信息
蛋白質的分子大小變異體檢測是蛋白質生產過程中至關重要的檢測指標,ce-sds法檢測廣泛應用在包括單抗在內的各種蛋白質純度檢測中。ce-sds純度檢測試劑盒是經過驗證的靈敏度、準確度、性價比、質量標準更高的國產化新型檢測試劑盒試劑盒中包含優(yōu)化的sds樣品緩沖液a(ph=9.0)sds樣品緩沖液b(ph=6.5)[1]涂層毛細管、優(yōu)化的凝膠緩沖液(保密配方)、內控標準品、酸堿沖洗液等試劑及耗材。經過驗證,試劑盒可廣泛應用于蛋白質還原及非還原ce-sds純度檢測,并且可在市面上常見毛細管電泳系統(tǒng)中使用。
[試劑盒成分信息]試劑盒儲存條件
注意:
凝膠緩沖液或者sds樣品緩沖液在使用之前,若注意到試劑瓶底部有沉淀,需室溫攪拌或者超聲波超聲直至試劑瓶中緩沖液溶解后方可使用。在吸取緩沖液進毛細管電泳系統(tǒng)進樣之前,緩沖液需保證在室溫中放置至少4小時。
2.蛋白分子量標準品信息
蛋白分子量標準品包含14.3,29.0,44.2,55.0,6.4,105及150kd的蛋白質,用ce-mw蛋白質分子量測定實驗,該產品不包括在試劑盒中,需單獨采購。
3.內控標準品信息
14.3kda的蛋白質作為遷移標記物,用于蛋白樣品相對于內標的相對遷移來計算分子量,可獲得更準確的分子量結果和鑒定信息。另外,內控標準品可作為常規(guī)蛋白純度檢測內標,用于校準出峰時間。
[樣品處理]
1.蛋白分子量標準品制備
(1)非還原模式
用樣品緩沖液溶解稀釋蛋白分子量標準品,使蛋白的終濃度0.2-2mg/ml之間,總體積95ul。加入5uln-乙基馬來酷亞胺(nem)溶液。蓋好瓶蓋,用封口膜封好,并充分混勻，離心機6000rpm離心至少1分鐘。70°c水浴10分鐘。室溫冷卻至少3分鐘,離心機6000rpm離心至少1分鐘。轉移95ul制備好的樣品至內插管中,內插管放入進樣瓶中,蓋好進樣瓶蓋子。
(2)還原模式
用樣品緩沖液溶解稀釋蛋白分子量標準品,使蛋白的終濃度在0.2-2.0mg/ml之間,總體積為95ul。加入5ul2-琉基乙醇,蓋上瓶蓋,用封口膜封好,并充分混勻,離心6000rpm離心至少1分鐘。70°c水浴10分鐘。室溫冷卻至少3分鐘,離心機6000rpm離心至少1分鐘。轉移95ul制備好的樣品至內插管中,內插管放入進樣瓶中,蓋好進樣瓶蓋子。
2.蛋白樣品預處理
蛋白樣品的脫鹽:信號強度和分離度對于蛋白中鹽的濃度十分敏感,如果蛋白樣品濃度低于10mg/ml并且緩沖液鹽的終濃度高于50mm,樣品的進樣效率就會降低以下是使用超濾法對樣品的脫鹽步驟。
向超濾離心管中加入1ml蛋白樣品,再加入1mlsds樣品緩沖液。7000g離心20min。再加入2 ml樣品緩沖液,7000 g離心20 min。上下顛倒超濾離心管使上層溶濃在濾膜作用下濾到新的小瓶中,并在5000g下離心3min。將蛋白樣品轉移到樣品管中,加入樣品緩沖液使終量為1ml。
3.蛋白樣品的濃度
保證在加入sds樣品緩沖液后,蛋白的濃度在0.2-2.0mg/ml之間,推薦最佳蛋白濃度為1mg/ml。如果蛋白濃度過高,與蛋白結合的sds就會不足,導致峰變寬而且分辨率降低;如果蛋白濃度過低,信號就會相應變低。
4.非還原樣品處理
對比一個蛋白的還原和非還原狀態(tài)可以得到一些結構信息，通過烷基化蛋白樣品口以減少由于蛋白自動還原產生的蛋白異質性。以下是配制非還原蛋白樣品的過程
(1) 烷基化試劑的制備
使用100mm n-乙基馬來酷亞胺(nem)或800 mm碘酷胺(am)作為烷基化試劑[2]3.加入蛋白質和分析樣品中后分別稀釋20倍至終濃度5 mm或40 mm。
a)稱取12.5mgnem或148mglam置于1.5ml離心管中。
b)加入1000ul超純水,蓋好瓶蓋并充分混合并標記。2-8°c避光保存,有效期5天
(2)樣品的制備
用樣品緩沖液溶解稀釋樣品,使蛋白的終濃度0.2-2mg/ml之間,總體積95ul。加入2ul的內標。加入5uln-乙基馬來酷亞胺(nem)溶液。蓋好瓶蓋,用封口膜封好,并充分混勻,離心機6000rpm離心至少1分鐘。70°c水浴10分鐘。室溫冷卻至少3分鐘,離心機6000rpm離心至少1分鐘。轉移95ul制備好的樣品至內插管中,內插管放入進樣瓶中,蓋好進樣瓶蓋子。
5.還原樣品處理
用樣品緩沖液溶解稀釋樣品,使蛋白的終濃度在0.2-2.0mg/ml之間,總體積為95ul加入2ul的內標。加入5ul2-琉基乙醇,蓋上瓶蓋,用封口膜封好,并充分混勻,離心機6000rpm離心至少1分鐘。70°c水浴10分鐘。室溫冷卻至少3分鐘,離心機6000rpm離心至少1分鐘。轉移95ul制備好的樣品至內插管中,內插管放入進樣瓶中,蓋好進樣瓶蓋子。