介紹：近年來，食品中的農(nóng)藥殘留問題越來越受到社會的重視。國內(nèi)外關于水果蔬菜等食品中的農(nóng)藥殘留研究多集中于對 食品原料的報道；咖啡作為一種加工的、在日常生活中直接泡飲的食品，其中的農(nóng)藥殘留受到的關注卻不多。有機 氯農(nóng)藥盡管禁用多年，卻因其化學性質(zhì)穩(wěn)定、脂溶性強、易在環(huán)境和生物體中富集，至今仍能在大氣[1]、水體[2]及 土壤[3]中檢出。由于咖啡是一種加工食品，加工過程中的各個環(huán)節(jié)都可能受到污染。迄今為止，國內(nèi)外有關咖啡的 殘留分析研究報道不多，不僅僅因為所受關注較少，還因為咖啡比一般的植物性產(chǎn)品成分復雜[4]，顆粒較細，油脂 及色素含量較高，樣品中被測物濃度較低
因此，本文采用加速溶劑萃取，結(jié)合凝膠滲透色譜法及柱層析法，通過氣相色譜-負離子化學電離-質(zhì)譜檢測器進行 分析，建立了咖啡中 8 種有機氯農(nóng)藥的殘留測定方法。
1. 實驗部分 1.1 儀器與試劑 加速溶劑萃取儀（ase200 自動分析儀，dionex 公司 ）； 自動凝膠滲透色譜儀（o.i.公司），凝膠色譜柱：25cm×15mm，填料（200-400 目）：bio-beads s-x3； pe氣質(zhì)聯(lián)用儀：pe clarus600gc-nci-ms，色譜柱：vf-5 ms 毛細管柱（30m×0.25mm×0.25μm） 二氯甲烷、正己烷、丙酮、*；分析純（北京化工廠）；環(huán)己烷：色譜純（acros organics ltd., usa）。
凈化柱：填充 0.7g 弗羅里硅土（60-100 目，含水 2%），0.5g 石墨化炭黑（150-200 目）；用前依次用 10ml 正己烷 /丙酮（v/v，85:15）、5ml 正己烷預淋洗。
有機氯農(nóng)藥標準品：α-六六六，β-六六六，γ-六六六，δ-六六六，o,p’-ddt，p,p’-ddt，p,p’-ddd， p,p’-dde，由*農(nóng)藥檢定所提供。有機氯農(nóng)藥標準品儲備液（20mg/l）和工作液（0.20，0.50，1.0， 2.0，5.0，10，20，50μg/l）均用色譜純環(huán)己烷配制，儲存于 4℃冰箱中。
1.2 樣品的處理 1.2.1 樣品的提取 稱取樣品約 4g（至 0.01g）于 22mlase 萃取池中，用正己烷/丙酮（v/v,1:1）[5]于 100℃，1500psi 靜態(tài)萃取 5min，淋洗體積為 6
1.2.2 樣品凈化 將 2ml（含 2g 樣品）濃縮液 用 gpc 凈化，流動相為二氯甲烷，流速 3ml/min，接收 9.5-12min 流出液，濃縮定容 至 1.5-2ml，繼而加到凈化柱上，用正己烷/丙酮（v/v，85:15）洗脫，接收前 8ml 洗脫液，濃縮并定容至 1ml， 供 gc-nci-ms 檢測。
1.3 樣品的檢測 氣相色譜條件：始溫 120℃，保持 2min，以 10℃/min 升至 210℃，再以 6℃/min 升至 260℃/min，保持 5min；進樣口溫度 250℃；不分流進樣；氦氣 1.0ml/min；進樣量 1μl。
質(zhì)譜條件：電離方式 nci，電離電壓 70ev，離子源溫度 180℃；傳輸線溫度 250℃；光電倍增器電壓 450v；選擇 離子分析條件見表 1。
以樣品空白、標準品、樣品、標準品的順序進樣，每個重復進樣兩次。 表 1 待測農(nóng)藥化合物名稱，通道數(shù)，時間窗口，定性離子，定量離子，標準曲線方程和相關系數(shù)
2. 結(jié)果與討論 2.1. 方法的線性關系 將混合儲備液（20mg/l）配制成 0.20，0.50，1.0， 2.0，5.0，10，20，50μg/l 的有機氯農(nóng)藥標準工作液，按 “1.3”節(jié)選定的儀器條件進樣，以峰面積對濃度作標準曲線，得 8 種有機氯農(nóng)藥的線性方程、相關系數(shù) r（見表 1）及方法檢測限（見表 2）。5μg/l 有機氯農(nóng)藥混合標準品圖譜見圖 1（a）。
結(jié)果表明，8 種有機氯農(nóng)藥在 0.20~50.0µg/l 范圍內(nèi)線性良好，相關系數(shù) r 達到 0.9995~0.9998，可以滿足殘留定 量分析的要求。根據(jù)信噪比（s/n=10）計算得出，8 種有機氯農(nóng)藥的方法檢出限在 0.002~0.069ng/g 之間，結(jié)果見
圖 1 5μg /l 有機氯農(nóng)藥混合標準品(a)，空白咖啡樣品(b)及添加 5μg/l 咖啡樣品(c)的選擇離子色譜圖 其中: 1. α-六六六；2. β-六六六；3. γ-六六六；4. δ-六六六；5.p,p’- dde；6.p,p’- ddd；7. o,pddt；8. p,p’-ddt
2.2. 前處理方法的選擇 樣品中有機氯農(nóng)藥的前處理方法很多，如提取方法有索氏抽提法、振蕩浸提法、固相萃取法等，凈化方法 有磺化法、柱層析法、液液分配法等。本實驗利用ase萃取效率高、有機溶劑用量少、快速及自動化等優(yōu)點[6] ， 采用gpc去除大部分油脂等大分子雜質(zhì)，再結(jié)合柱層析去除油脂與色素等雜質(zhì)，解決咖啡樣品因顆粒較細不易提 取、油脂與色素等雜質(zhì)較多難以凈化等問題，優(yōu)化萃取及凈化步驟，從而提高回收率。
2.3. 檢測方法的選擇 常見的有機氯農(nóng)藥檢測方法有 gc-ecd[7] ，gc-ms/ms[8] ，gc-ei-ms[9]等，8 種有機氯 農(nóng)藥（α-六六六，β-六六六，γ-六六六，δ-六六六，o,p’-ddt，p,p’-ddt，p,p’-ddd，p,p’-dde，下 同）的方法檢出限分別為 0.53~1.83μg /kg，0.333~1.667μg /kg 及 0.167μg /kg；近年來，gc-nci-ms 技術 迅猛發(fā)展，逐漸廣泛應用于基質(zhì)復雜的農(nóng)藥殘留分析中，如 l.b. rivera-rodríguez 等[9]研究野生鳥類血漿中 的有機氯農(nóng)藥，方法檢測限可達 0.015~0.084μg /kg。本文采用 gc -nci –ms，通過選擇特定的離子，排除檢 測中基質(zhì)的干擾（見 5μg /l 有機氯農(nóng)藥混合標準品圖譜見圖 1（a）與空白咖啡樣品（圖 1b）），方法檢出限為 0.002~0.069μg /kg，具有更高的選擇性和靈敏度。
2.4. 方法的回收率和精密度 在空白樣品中分別加入 0.5，5μg/l 標準工作液 1.0ml，按照“1.2”節(jié)操作方法制備樣品溶液，以峰面積計算 各種農(nóng)藥在兩個添加水平的回收率，重復試驗 6 次，計算各種農(nóng)藥的平均回收率及相對標準偏差（見表 2）。添 加 5μg/l 咖啡樣品的選擇離子色譜圖見圖 1c。 結(jié)果顯示，在 5μg /kg 添加水平，平均加標回收率為 94.3%~107.2%，rsd 為 3.7%~10.6%；在 0.5μg /kg 添加 水平，平均加標回收率為 96%~110.1%，rsd 為 3.5~10.2%，均滿足殘留分析的要求。
3. 總結(jié) 本文建立了咖啡中 ase 提取，gpc 與柱層析相結(jié)合凈化，gc-nci-ms 檢測 8 種有機氯農(nóng)藥殘留量的方 法。該方法能有效排除咖啡中大量油脂及色素對檢測的干擾，回收率和精密度符合殘留分析的要求，具有 良好的應用前景。