土壤蔗糖酶(solid-sucrase, s-sc)試劑盒說明書
for research use only
僅供研究用
貨號(hào):qys-235096
分光光度法 50 管/24 樣
土壤蔗糖酶(solid-sucrase, s-sc)試劑盒說明書測(cè)定意義:
s-sc 能夠水解蔗糖變成相應(yīng)的單糖而被機(jī)體吸收,其酶促作用產(chǎn)物與土壤中有機(jī)質(zhì)、氮、磷含量,微生物數(shù)量及土壤呼吸強(qiáng)度密切關(guān),是評(píng)價(jià)土壤肥力的重要指標(biāo)。
測(cè)定原理:
s-sc 催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖,進(jìn)一步與 3,5-二硝基水楊酸反應(yīng),生成棕紅色氨基化合物,在 510nm 有特征光吸收,在一定范圍內(nèi) 510nm 光吸收增加速率與 s-sc 活性成正比。
自備用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml 玻璃比色皿、研缽、冰、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:甲苯 5ml×1 瓶,4℃保存;(自備)
試劑二:液體 15ml×1 瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前每瓶加入 40ml 蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體 30ml×1 瓶,4℃保存。
土壤蔗糖酶(solid-sucrase, s-sc)試劑盒說明書測(cè)定步驟和加樣表:
試劑名稱 測(cè)定管 對(duì)照管
風(fēng)干土樣(g) 0.1 0.1
試劑一(μl) 15 15
振蕩混勻,使土樣全部濕潤(rùn),37℃水浴 15min
試劑二(μl) 250 250
試劑三(μl) 750
蒸餾水(μl) 750
充分混勻,放入 37℃水浴培養(yǎng) 24 小時(shí),10000 g,4℃,離心 5min,取上清液
上清液(μl) 200 200
試劑四(μl) 500 500
充分混勻,放入沸水浴中煮沸 5min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻后充分混勻,蒸餾水稀釋 10 倍后(可以吸取 100μl,加入 900μl 蒸餾水稀釋;如果吸光度大于 4,可以適當(dāng)加大稀釋倍數(shù)),510nm 處蒸餾水調(diào)零,讀吸光值 a。計(jì)算 δa=a 測(cè)定管-a 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
s-sc 活性計(jì)算:
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為 y = 4.9x -0.062;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/ml),y 為吸光值。單位的定義:每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個(gè) s-sc 活力單位。
s-sc 活力(u /g 土樣)=( δa+0.062) ÷4.9×10×v 反總÷w÷t =20.7×(δa+0.062) 10:稀釋倍數(shù);t:反應(yīng)時(shí)間,1d; v 反總:反應(yīng)體系總體積:1.015ml;w:樣本質(zhì)量,