谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alt/gpt）檢測(cè)試劑盒使用說明！
產(chǎn)品名稱：谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alt/gpt）檢測(cè)試劑盒 微板法
檢測(cè)原理：谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alt）在37℃及ph7.4條件下，作用于丙氨酸及a-酮戊二酸組成的底物，生成丙酮酸及谷氨酸。反應(yīng)30分鐘后（固定時(shí)間）加入2,4-二硝基苯肼（dnph）鹽酸溶液，既中止反應(yīng)，同時(shí)dnph與酮酸中羰基加成，生成丙酮酸苯腙。苯腙在堿性條件下呈紅棕色，于505nm比讀吸光度并計(jì)算酶活力。
測(cè)定范圍：本試劑盒可以測(cè)定各類動(dòng)物血清(漿)、組織及培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)液等樣本中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力（alt）。
自備儀器和用品：
酶標(biāo)儀（510nm或505nm）、微量移液器、漩渦混勻器
試劑組成：
96t
規(guī)格
組分
保存
試劑一
5mlx1瓶
谷丙轉(zhuǎn)氨酶基質(zhì)液
4℃冰箱保存6個(gè)月
試劑二
5mlx1瓶
2,4-二肖基苯肼液
4℃冰箱保存6個(gè)月
試劑三
5mlx1瓶
4mol/l氫氧化鈉液
室溫密封保存6個(gè)月
試劑四
1支
2umol/ml丙酮酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液
4℃冰箱保存6個(gè)月
試劑五
1支
0.1mol/l磷酸鹽緩沖液
4℃冰箱保存6個(gè)月
0.4mol/l氫氧化鈉液的配制：臨用時(shí)按4mol/l氫氧化鈉液：雙蒸水=1:9的比例稀釋，需多少配多少，室溫密封保存。
操作過程（僅供參考）
1.樣本前處理：
a.血清（漿）及其他液體待測(cè)樣本：直接取樣測(cè)定。
b.動(dòng)物組織樣本：準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量（g）:體積（ml）=1：9的比例，加入9倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下機(jī)械勻漿，2500轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清液待測(cè)。
c.培養(yǎng)細(xì)胞樣本前處理：將收集好的細(xì)胞用等滲緩沖液（推薦0.1mol/l ph7—7.4磷酸鹽緩沖液或生理鹽水）清洗1—2次；1000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，棄上清，留細(xì)胞沉淀，加入勻漿介質(zhì)（推薦加入0.1mol/l ph7—7.4磷酸鹽緩沖液或生理鹽水），冰浴條件下超聲破碎或手動(dòng)勻漿，制備好的勻漿液不離心，待測(cè)。
2．操作表：
測(cè)定孔
對(duì)照孔
基質(zhì)液（ul）37℃已預(yù)溫
2o
20
待測(cè)樣本（ul）
5
測(cè)定孔每吸取一個(gè)樣本，將吸嘴伸入孔板底部基質(zhì)液中，反復(fù)吸打混勻后
37℃反應(yīng)30分鐘
2,4-二肖基苯肼液(ul)
20
20
待測(cè)樣本（ul）
5
對(duì)照孔每吸取一個(gè)樣本，將吸嘴伸入孔板底部液體中，反復(fù)吸打混勻后
37℃反應(yīng)20分鐘
0.4mol/l氫氧化鈉液(ul)
200
200
輕輕水平搖動(dòng)96孔板混勻，室溫放置15分鐘，510nm波長，酶標(biāo)儀測(cè)各孔o(hù)d值，以（絕對(duì)od值=測(cè)定孔0d值減去對(duì)照孔o(hù)d值），查標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得相應(yīng)的alt/gpt活力單位。
注意事項(xiàng)：
1.比色法中常用的有賴氏（reitman-frankel）法及金氏法（king）法。賴氏法標(biāo)準(zhǔn)曲線所定單位數(shù)，是用實(shí)驗(yàn)方法和卡門氏反光光度法（速率法）作對(duì)比測(cè)定求得的。以卡門氏單位報(bào)告結(jié)果比較準(zhǔn)確。
卡門氏單位定義：1ml液體，反應(yīng)液總?cè)萘?ml，波長340nm，1cm光徑，25℃，1min內(nèi)所生成的丙酮酸，使nadh氧化成nad+而引起吸光度每下降0.001為一個(gè)單位（1卡門氏單位=0.482u/l,25℃）
2.一般血清標(biāo)本內(nèi)源性酮酸很少，血清對(duì)照孔吸光度值接近試劑空白孔（以雙蒸水代替血清，其他和對(duì)照孔同樣操作）。所以成批標(biāo)本測(cè)定時(shí)，一般不需要每一標(biāo)本都作本身血清對(duì)照孔，以試劑空白孔代替即可，但對(duì)嚴(yán)重脂血、黃疸或溶血血清，每份標(biāo)本應(yīng)做對(duì)照孔。
3.酶活力超過150單位時(shí)，用生理鹽水稀釋血清后重測(cè)。
4.一般的血清對(duì)照孔（或稱標(biāo)本空白孔）的吸光度作為日常質(zhì)控的指標(biāo)之一；如相差大，可考慮a-酮戊二酸濃度、dnph濃度及儀器等原因引起。
5.血清中alt在室溫（25℃）可保存2天，在0--4℃可保存一周，在-25℃可保存1個(gè)月。
6.本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用，不做其它用途！
關(guān)鍵詞：酶標(biāo)儀 移液器