一、超氧化物歧化酶(sod)是一種廣泛存在于生物體內(nèi)的金屬酶,作為重要的氧自由基清除劑,能催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用,生成h?o?和o?。sod不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是h?o?主要生成酶,在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。huang嘌呤及huang嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)能夠產(chǎn)生超氧陰離子(o??),o??可還原氮藍(lán)四唑生成藍(lán)色甲臜,產(chǎn)物在560nm處具有特征吸收峰;sod可清除o??,從而抑制了甲臜的形成,反應(yīng)液顏色越深,表明sod活性愈低,反之活性越高,通過吸光值的變化即可表征sod的活性。
二、測(cè)定過程中所需要的儀器和試劑:可見分光光度計(jì)、1ml玻璃比色皿、研缽/勻漿器、可調(diào)式移液器、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴/培養(yǎng)箱和蒸餾水。
三、吸光值測(cè)定:將反應(yīng)液置于1ml玻璃比色皿中測(cè)定560nm處吸光值,記為a測(cè)定、a對(duì)照、a空1、a空2;計(jì)算δa測(cè)定=a測(cè)定-a對(duì)照,δa空白=a空1-a空2。注:空白管1和空白管2只需測(cè)定1-2管,每個(gè)樣本均需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
四、該試劑盒含有所有測(cè)定超氧化物歧化酶活性所需的試劑和溶液,使用了基于huang嘌呤氧化酶和全新顯色試劑的間接分析方法。在該試劑盒中所用的顯色試劑的化學(xué)及生物化學(xué)特性保證了應(yīng)用的便利性和測(cè)試結(jié)果在寬范圍內(nèi)的線性。超氧化物歧化酶是負(fù)責(zé)消除超氧自由基(o2-)的酶,從而可保護(hù)細(xì)胞免受自由基相關(guān)的損傷。他們可催化兩個(gè)超氧化物自由基歧化為過氧化氫和氧氣。