高效液相色譜儀主要用于分析高沸點不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量較大的有機化合物。該儀器主要由溶劑輸送系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)(色譜柱)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理與記錄系統(tǒng)組成，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、食品科學(xué)、藥物研究及環(huán)境研究等領(lǐng)域。
工作原理：
儲液器中的流動相被高壓泵打入檢測系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)過進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱內(nèi)，由于樣本溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對運動時，經(jīng)過反復(fù)多次的“吸附-解吸”的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時樣本濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式輸出檢測結(jié)果。
使用時的常見問題：
1、渦流擴散
如果柱裝填不均勻，流動相的速度就快；有的部位結(jié)塊或裝直緊密則流動速度就慢，多條流路有快有慢就會使區(qū)帶變寬。因此固相載體的顆粒要小而均勻，裝柱要松緊均一，渦流擴散小，柱效率高。
2、分子擴散
分子擴散就是物質(zhì)分子由濃度高的區(qū)域向濃度低的區(qū)域運動，也稱縱向分子擴散。若要減少分子擴散就要采用小而均勻的固相顆粒裝柱。同時在操作時，如果流速太慢被分離物質(zhì)停留時間長，則擴散嚴重。
3、質(zhì)量轉(zhuǎn)移
被分離物質(zhì)要在流動相與固定相中平衡，這樣才能形成較窄的區(qū)帶。液相色譜中，溶質(zhì)分子要在兩個液相之間進行分配或在固相上被吸附和解吸附均需要一定的時間。流速快時，轉(zhuǎn)移速度慢，來不及達到平衡動相就會移動，這種物質(zhì)的非平衡移動會使區(qū)帶變寬。
4、動相流速
當流速太低時，分子擴散嚴重，特別是在氣相色譜中尤為突出。如果將理論塔板高度對流速作圖，理論塔板高度隨流速增加而快速下降，達到低值時，流速再加大則質(zhì)量轉(zhuǎn)移起主要作用，理論塔板高度又加大。在高效液相色譜中，流速稍快影響不大，但在凝膠過濾色譜中，因為物質(zhì)要滲透到凝膠內(nèi)部，所以質(zhì)量轉(zhuǎn)移影響大，流速加大會降低柱效率。
5、固定相顆粒大小
固定相顆粒越小柱效率越高，對流動相流動的阻力越大，需要加大壓力才能使它流動。