首先是玻片的處理,普通的蓋玻片用砂輪劃成自己要的大小的小方塊,先用洗衣粉洗干凈,用水沖靜烤干,然后泡酸過夜,撈酸后流水洗凈,烤干,置于器皿中高壓滅菌,然后再烤箱中大約8小時烤干備用。
爬片可以在培養(yǎng)皿 六孔板或24孔板中都可,我選擇在培養(yǎng)皿中爬。一為節(jié)約經(jīng)費(培養(yǎng)皿可以重復(fù)利用)二來覺得培養(yǎng)皿口大,操作比較方便。培養(yǎng)皿消毒同上,消毒時記得消兩把鑷子
具體操作是:用胰酶消化好細胞,充分吹打,使之成單細胞懸液(注意:這一點很重要,關(guān)系到將來爬出來片子的質(zhì)量)
取出消毒的培養(yǎng)皿,可以先加少量培養(yǎng)基(以使玻片與培養(yǎng)皿緊密接觸),將玻片小心放入擺放其中,然后將單細胞懸液一滴一滴的滴到玻片上。最后蓋上培養(yǎng)皿置于37度5%co2的暖箱中培養(yǎng),根據(jù)細胞生長狀況,24小時或更長時間適時取出爬片。
爬片置于37度pbs中洗三次,每次3到5秒鐘,然后在4%多聚甲醛中固定15分鐘,然后再用37度去離子水將甲醛沖干凈,注意手法輕柔,要不然掉片很厲害。同時操作過程中注意玻片的正反面,要不然真的是前功盡棄。
將做好的爬片置于濾紙上晾干,然后用中性樹膠粘在載玻片上。注意一定要等中性樹膠干了之后才能做后續(xù)實驗,要不然玻片會掉下來的,就又是前功盡棄了 做好的細胞爬片可以放在-20保存?zhèn)溆茫唧w能保存多長時間不太清楚,當(dāng)然盡量早用。