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        凝血酶(Thrombin)的用途

        發(fā)布時間:2024-06-07
        凝血酶(thrombin)的用途
        來源:牛血漿
        性狀:白色或微黃色凍干粉
        規(guī)格:1000u/支
        保存:凍干粉4-8℃
        純度:sds-page電泳純度≥95%(無蛋白酶)
        比活:≥2000u/mgpr
        使用方法:生理鹽水溶解使用,復溶后-20度凍存,避免反復凍融
        用途:凝血酶時間檢測試劑(tt)配制、纖維蛋白原檢測試劑(fib)配制、tb位點酶切、納豆激酶活力測定、尿激酶活力測定等,非臨床治療使用。
        簡介:凝血酶(thrombin)來源于牛血漿,分子量37kd,是由兩條肽鏈(31kd和6kd)通過二硫鍵組成的。凝血酶是凝血酶原(凝血因子ⅱ)激活后形成的蛋白質(zhì)水解酶,其催化纖維蛋白原(fibrinogen)水解掉a肽和b肽,由此形成纖維蛋白單體,單體進一步聚合。
        由于凝血酶具有切割序列專一性強,水解效率高的特點,它被廣泛地應用于基因工程產(chǎn)品的開發(fā),其應用之一是作為工具蛋白酶用于重組融合蛋白質(zhì)的特異性斷裂,尤其適用于生物工程制藥業(yè)及基因工程、生物化學、分子生物學等研究。
        凝血酶是一種廣泛用于切割標簽的蛋白酶,能夠有效切質(zhì)量比僅為1:2000的蛋白。建議消化緩沖液:20mmtris-hcl緩沖液,150mm nacl,ph8.0,于20℃到37℃之間切割0.3到16小時,1u可切割約0.1-0.5mg蛋白。
        凝血酶最佳切割位點是x4-x3-p-r[k]-x1'-x2',這里x4和x3是疏水氨基酸而x1'和x2'是非酸性氨基酸,一些經(jīng)常使用的識別位點l-v-p-r-g-s,l-v-p-r-g-f,和m-y-p-r-g-n。在x4-x3-p-r-g-x2'之間切割比在4-x3-p-k-l-x2'更有效。其他識別位點是x2-r[k]-x1',這里x2或者x1'是甘氨酸,例如a-r-g和g-k-a,這里切割發(fā)生在第二個殘基后。在凝血酶切割位點和n末端標簽之間插入五個甘氨酸殘基可改善切,通過這一甘氨酸連接肽只需較少酶量就可達到完-全切割,而且也可以避免可能發(fā)生的錯誤切割。凝血酶可從切割產(chǎn)物中用p-氨基瓊脂糖親和純化,或者苯甲脒瓊脂糖移去。
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