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        細(xì)胞培養(yǎng)凍存和復(fù)蘇注意事項

        發(fā)布時間:2024-06-06
        細(xì)胞凍存和復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)里面容易出問題的部分,因此必須注意以下幾點:
        1. 注意無菌操作。
        2. 取細(xì)胞的過程中可能會接觸液氮,一定注意帶好防凍手套,護目鏡。
        此項尤為重要,如果凍存管密封不嚴(yán),細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,解凍時,在水浴中搖晃,凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸,所以,一定要戴保護眼鏡和手套,復(fù)蘇過程中應(yīng)蓋上恒溫水浴鍋的蓋。
        3. 應(yīng)在1-2min內(nèi)使凍存液*融化。如果復(fù)溫速度太慢,則會造成細(xì)胞損傷。另外,細(xì)胞復(fù)蘇后的操作hao在4℃冰浴中進(jìn)行,以減少冷凍保護劑對細(xì)胞的毒性。
        4. 復(fù)蘇過程中,升溫的速率要大,把從液氮取出的細(xì)胞在短的時間內(nèi)放入水浴鍋。
        5. 離心前須加入少量培養(yǎng)液。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細(xì)胞的損傷。
        細(xì)胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細(xì)胞解凍時1ml細(xì)胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,經(jīng)驗總結(jié),培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。
        復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問題:復(fù)蘇1管細(xì)胞一般根據(jù)情況可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細(xì)胞濃度過低,不利于細(xì)胞的貼壁。
        加培養(yǎng)基的量放入問題:這個量的多少的把握主要涉及到的問題是dmso的濃度,從如果加培養(yǎng)基的太少,dmso的濃度就會比較大,就會影響細(xì)胞生長,從以前的資料來看,dmso的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵?xì)胞沒有什么影響。還有一個說法是1%。所以如果凍存液的濃度是10%dmso,那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。
        關(guān)鍵詞:恒溫水浴鍋 水浴鍋
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