摘要：本文采用 agilent 1290 infinity ⅱ 液相色譜和 6470 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)測定食用油中的 3 種辣椒素類成分。該方法與中國食品藥品檢定研究院頒布的 bjs 201801《食用油脂中辣椒素的測定》保持一致，并對樣品前處理過程進(jìn)行了優(yōu)化，簡化了操作步驟。所考察的 3 種辣椒素類成分的檢測限為 5–10 pg/ml，*原補(bǔ)充檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中的檢測限要求。
前言：“地溝油”泛指各種劣質(zhì)油脂，包括泔水油、煎炸老油、劣質(zhì)動(dòng)物內(nèi)臟或皮脂的煉制油、食品及相關(guān)企業(yè)產(chǎn)生的廢棄油脂等，其中來自餐飲業(yè)的泔水油是地溝油的主要來源之一。辣椒是餐飲業(yè)中用量較大的調(diào)料，使用范圍遍布全國各地。辣椒中的辣味成分主要是*，其具有脂溶性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、沸點(diǎn)高等特點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，天然*由 14 種辣椒素同系物組成，其中辣椒素和二氫辣椒素的總含量占*的 90% 以上。合成辣椒素由人工合成得到，由于其價(jià)格和辣度與天然辣椒素相比具有優(yōu)勢，因此廣泛應(yīng)用于食品添加劑和餐飲行業(yè)中。通常情況下，正常的食用油基本不含*，而接觸過辣椒的餐廚廢棄油脂中難以避免地含有這類成分，而目前的地溝油加工工藝很難*去除脂溶性強(qiáng)的*物質(zhì)。因此可將含量較高的天然辣椒素、二氫辣椒素和合成辣椒素（結(jié)構(gòu)式如圖 1 所示）作為鑒別餐飲廢棄油脂的特征指標(biāo)。
2012 年 8 月，由大連化物所和重慶起草的《食用植物油中*成分的液相色譜-質(zhì)譜檢測方法及其在“地溝油”識(shí)別中的應(yīng)用》[1] 為質(zhì)譜鑒別地溝油開創(chuàng)了先河。其后中國食品藥品檢定研究院將《食用油脂中辣椒素的測定 bjs 201801》[2] 作為食用油檢測過程中的補(bǔ)充檢驗(yàn)方法。這兩項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)均以天然辣椒素、二氫辣椒素和合成辣椒素作為鑒別地溝油的特征指標(biāo)。
本文使用 agilent 1290 infinity ⅱ 液相系統(tǒng)和 安捷倫6470 三重四極桿系統(tǒng)對 3 種特征指標(biāo)進(jìn)行含量測定，并建立了相應(yīng)的樣品前處理流程。
實(shí)驗(yàn)部分：試劑和樣品所有標(biāo)準(zhǔn)品均購自 accustandards 公司 (new haven, ct, usa)。質(zhì)譜所用純甲酸和乙腈購自 merck 公司 (kenilworth, usa)。水由 milli-q 超純水系統(tǒng)制得。儀器和設(shè)備 agilent 1290 infinity ⅱ 液相色譜系統(tǒng)，配備如下安捷倫組件： g7120a 二元泵、g7167b 自動(dòng)液體進(jìn)樣器、g7116b 柱溫箱和 g7117b 二極管陣列檢測器。所用質(zhì)譜儀為 agilent 6470 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)。標(biāo)樣前處理用甲醇將 3 種標(biāo)準(zhǔn)品的混合溶液稀釋成 5 pg/ml–100 ng/ml 的校準(zhǔn)標(biāo)樣，儲(chǔ)存在棕色樣品瓶中。樣品前處理準(zhǔn)確稱取 0.5 g 樣品加入 10 ml 具塞塑料試管中，加入 1 ml 二氯甲烷，再加入 3 ml 2% 氫氧化鈉溶液；渦旋提取 10 min，以 4000 r/min 離心 10 min，取上層水相；再用 3 ml 2% 氫氧化鈉溶液將殘留有機(jī)相重復(fù)提取一次，合并水相。 agilent bond elut plexa pax 小柱預(yù)先用 3 ml 乙腈淋洗 3 次，再用 3 ml 純水淋洗 2 次進(jìn)行平衡；然后將上述水相提取液加入小柱，控制流速至每秒 1–2 滴，待全部溶液通過 spe 小柱后，以 3 ml 超純水淋洗 2 次，棄去流出液；終以 3 ml 的 5% 甲酸乙腈洗脫 2 次。用 50 °c 氮?dú)鈱⒁译嫦疵撘捍抵两?，?0.5 ml 甲醇溶解后，通過微孔濾膜（0.22 μm，有機(jī)相）進(jìn)行過濾。并將濾液置于樣品瓶內(nèi)襯管中，以供 lc-ms/ms 測定。
液相條件色譜柱： agilent eclipse plus-c18, 2.1 × 50 mm, 1.8 μm 柱溫： 40 ºc 進(jìn)樣體積： 2 μl 流動(dòng)相： a) 0.1% 甲酸水溶液 b) 0.1% 甲酸乙腈溶液運(yùn)行時(shí)間： 10 min 流速： 0.3 ml/min 梯度程序： t (min) b (%) 0 25 1 25 4 95 6 95 質(zhì)譜條件鞘氣溫度： 400 °c 鞘氣流速： 12 l/min 干燥氣溫度： 300 °c 干燥氣流速： 8 l/min 霧化器壓力： 40 psi 毛細(xì)管電壓： 3000 v 噴嘴電壓： 0 v delta emv： 300 v mrm 離子對： 如表 1
結(jié)論：本文使用 agilent 1290 infinity ⅱ 液相色譜和 6470 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)對食用油中的 3 種辣椒素類化合物進(jìn)行了測定。uhplc 色譜分析只需 6 分鐘，靈敏度是 bjs 201801《食用油脂中辣椒素的測定》補(bǔ)充檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)方法的 10–20 倍。并對樣品前處理方法進(jìn)行了優(yōu)化，簡化了操作步驟，完*夠滿足實(shí)際樣品的測試需求。