人白細(xì)胞介素-1elisa 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用 標(biāo)本：血清或血漿
試驗(yàn)原理：
il-1試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（elisa）.已知il-1濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將il-1和*標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的hrp。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物a、b，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中il-1的濃度呈比例關(guān)系。
自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
避免直接接觸終止液和底物a、b。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。
實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
操作注意事項(xiàng)
試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物a、b液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
底物a應(yīng)揮發(fā)，避免長時(shí)間打開蓋子。底物b對(duì)光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取od值。
加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
人白細(xì)胞介素-1elisa 檢測試劑盒
樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
血漿-----edta、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑的準(zhǔn)備
標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。
洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-hrp，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物a、b各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的od值。
人白細(xì)胞介素-1elisa 檢測試劑盒
局限
6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)r值為0.990。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的od值
2、以吸光度od值為縱坐標(biāo)（y），相應(yīng)的il-1標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（x），做得相應(yīng)的曲線，樣品的il-1含量可根據(jù)其od值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
3、檢測值范圍：0-800pg/ml
4、敏感度： 1.0 pg/ml
人白細(xì)胞介素-1elisa 檢測試劑盒
da2272-0.2mllair-1/cd305（leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 1） 白細(xì)胞相關(guān)免疫球蛋白樣受體1抗體0.2ml
da2273-0.2mllayilin 透明質(zhì)酸受體抗體0.2ml
da018-2mlgoat anti-mouse igg（beads） 兔抗小鼠igg 免疫磁珠2ml
da2274-0.2mllair-2/cd306（leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 2） 白細(xì)胞相關(guān)免疫球蛋白樣受體2抗體0.2ml
da2275-0.2mllcat（lecithin cholesterol acyl transferase） 卵磷*?；D(zhuǎn)移酶抗體0.2ml
da2277-0.2mlldl-r （low-density lipoprotein receptor precursor） 低密度脂蛋白受體抗體0.2ml
da2278-0.2mlox-ldl（oxidized low density lipoprotein） 抗氧化低密度脂蛋白抗體0.2ml
dar1218-0.1mlgoat anti-mouse igm/alexa fluor 488 alexa fluor 488標(biāo)記羊抗小鼠igm0.1ml
dar1219-0.1mlgoat anti-rat igg/alexa fluor 488 alexa fluor 488標(biāo)記羊抗大鼠igg0.1ml
da2281-0.2mllef-1（lymphoid enhancing factor-1） 淋巴增強(qiáng)因子-1抗體0.2ml
da2282-0.2mlleptin 瘦素抗體0.2ml
da2284-0.1mlleptin receptor 瘦素受體抗體0.1ml