rna抽提的竅門
1：快速阻止 rnase 活性 – 樣品收集后快速冷凍，裂解時快速操作滅活 rnase。
2：選擇合適的抽提方法 – 高核酶含量的組織，脂肪組織最好用含苯ben酚的方法。
3：預(yù)判質(zhì)量要求 – northern，cdna 文庫構(gòu)建對完整性要求高，rt-pcr, rpa (ribonuclease protection assay) 對完整性要求不是很高。rt-pcr 對純度 (酶抑制物殘留) 要求很高。
4：徹di底勻漿是提高得率和降低降解的關(guān)鍵。
5：檢查 rna 的完整性 – 電泳檢測，28s:18s =2:1 是完整的標(biāo)志，1:1 對大部分實(shí)驗(yàn)也是可以接受的。
6：去除 dna – 用于 rt-pcr, array analysis 最好用 dnase i 去除 dna。
7：降低外源酶的污染 – 不能從外面又導(dǎo)入酶。
8：低濃度的核酸濃縮時，要加入助沉淀試劑。但要防止助沉淀劑含酶及 dna 污染。
9：徹di底溶解 rna，必要時可以 65c 加熱 5 分鐘。
10：合適的保存方法 – 短時間可以 –20c 保存，長期請保存于 –80c。
提高rna得率
首先要意識到不同得樣品其 rna 含量差別很大。高豐度 (2-4ug/mg) 的如肝臟，胰腺，心臟，中豐度 (0.05-2ug/mg) 的如腦，胚胎，腎臟，肺，胸腺，卵巢，低豐度 (<0.05ug/mg) 的如膀胱，骨，脂肪。
1：裂解細(xì)胞使 rna 釋放出來 – rna 如果不被釋放出來，得率是會降低的。電動勻漿比其它勻漿方法效果更好，但也可能需要結(jié)合其它得方法，如液氮搗碎，酶消化 (lysozyme/lyticase)
2：抽提方法的優(yōu)化?；诒絙en酚的方法的最大問題是分層不徹di底和部分 rna 的丟失(不能全部將上清取出)。分層不徹di底是因?yàn)楹怂岷偷鞍踪|(zhì)含量高，可以用增加裂解液使用量或者降低樣品量解決。脂肪組織要增加一步氯仿抽提。rna 的丟失可以用反抽方法或者去除有機(jī)層后再離心的方法降低?；谥x心式方法的最大問題是樣品過量。