藥品名稱:
通用名:犬細小病毒(cpv)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的:
本試劑盒定性測定犬血液、或其它相關組織中細小病毒(cpv)
實驗原理:
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(elisa)測定標本中犬細小病毒(cpv)。用純化的犬細小病毒(cpv)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中細小病毒(cpv)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與hrp標記的細小病毒(cpv)抗體結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物tmb顯色。tmb在hrp酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(od值),與cutoff值相比較,從而判定標本中犬細小病毒(cpv)的存在與否。
試劑盒組成:
1 20倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 3ml×1瓶
2 酶標試劑 3ml×1/瓶 8 陽性對照 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×4條 9 陰性對照 0.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 3ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑a液 3ml×1瓶 11 封板膜 2張
6 顯色劑b液 3ml×1瓶 12 密封袋 1個
標本要求:
1.標本處理:血清、血漿標本可直接檢測
2.標本按要求制備后盡早進行實驗。如不能及時檢測,可將標本在-20℃保存一個月,但應避免反復凍融。
3.不能檢測含nan3的樣品,因nan3抑制辣根過氧化物酶的(hrp)活性。
操作步驟:
1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑a 50μl,再加入顯色劑b 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(od值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
結(jié)果判定:
試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值(cut off)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品od值< 臨界值(cut off)者為犬細小病毒(ppv)陰性
陽性判定:樣品od值≥ 臨界值(cut off)者為犬細小病毒(ppv)陽性
注意事項
1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請避光保存。
6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2m的硫酸,使用時必須注意安全。
規(guī)格:
48人份/盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月