液相色譜法作為21世紀(jì)一種快速發(fā)展的應(yīng)用分析方法。在很多領(lǐng)域都能夠見到它的身影。21世紀(jì)人們對(duì)科學(xué)技術(shù)的發(fā)展越來重視，使得我們分析的對(duì)象也越來越復(fù)雜，分析要求也越來約高。液相色譜的強(qiáng)大***在于能夠滿足我們現(xiàn)在所分析的對(duì)象。
高效液相色譜儀是在經(jīng)典液相色譜的基礎(chǔ)上，引入氣相色譜的理論和技術(shù)而發(fā)展起來的。在高效液相色譜中，流動(dòng)相與組分之間有一定的親和力，分離過程的實(shí)現(xiàn)是組分、流動(dòng)相和固定相三者間相互作用的結(jié)果，分離不但取決于組分和固定相的性質(zhì)，還與流動(dòng)相的性質(zhì)密切相關(guān)，一般情況下，高效液相色譜儀的分析可在室溫下進(jìn)行，由于采用顆粒極細(xì)的固定相，柱內(nèi)壓降很大，加******動(dòng)相黏度高，因此必須采用高入口壓，以此來維持一定的流動(dòng)相線速。高效液相色譜儀對(duì)于揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的物質(zhì)特別有利，它在醫(yī)藥、生化等方面具有非常重要的作用。
色譜柱的常見問題：
1.色譜柱污染：
目前,基層實(shí)驗(yàn)室多采用反相色譜柱,要減少色譜柱的污染***有效的辦法是要純化樣品。凡是樣品純化得越干凈,色譜柱的壽命***越長;反之,只有提取沒有純化的樣品,色譜柱柱效***會(huì)大幅下降。一般來說,要提取純化好的樣品,******的方法是用流動(dòng)相溶解樣品,這樣,一方面能減少色譜圖中的溶劑峰干擾,另一方面也能檢查樣品在流動(dòng)相中的溶解性。如果樣品進(jìn)樣后在流動(dòng)相中沉淀,會(huì)堵塞進(jìn)樣器和柱頭,甚至樣品分解,出現(xiàn)鬼峰。如果出現(xiàn)樣品與流動(dòng)相不溶要設(shè)法改變?nèi)芙鈼l件,可更換樣品溶劑,或改進(jìn)樣品純化處理的方法,或?yàn)V過去除不溶性物質(zhì)。
2.色譜柱阻塞與對(duì)策
如果配有保護(hù)柱,應(yīng)先去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析。如果色譜柱阻塞,可進(jìn)行反沖洗。如果問題仍然存在,色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞,建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦颉Ｈ绻麊栴}仍然存在,可能是進(jìn)口阻塞,更換入口處的篩板或更換色譜柱。如果必要,亦可更換色譜柱。
3.嚴(yán)格清場
清洗的過程是延長色譜柱壽命的關(guān)鍵,每次分析工作結(jié)束時(shí),要做好清場工作。如果流動(dòng)相是緩沖鹽,先用5%甲醇水沖洗30 min以上；如果流動(dòng)相是離子對(duì),先用50%甲醇水沖洗30 min以上；如果流動(dòng)相是酸性溶劑,先用純水沖洗30 min以上,流速0.5 ml#min-1,***后過度到用色譜甲醇沖洗色譜柱,目的是沖去吸附在柱上的強(qiáng)保留組分。如果用甲醇-水為流動(dòng)相也應(yīng)這樣沖洗色譜柱,在一定程度上可恢復(fù)柱效。