雞免疫球蛋白y(igy)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟
雞免疫球蛋白y(igy)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟
本試劑盒僅供研究使用。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中雞免疫球蛋白y(igy)水平。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入免疫球蛋白y(igy)，再與hrp標(biāo)記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物tmb顯色。tmb在hrp酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的。顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白y(igy)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（od值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中雞免疫球蛋白y(igy)濃度。
雞免疫球蛋白y(igy)酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成
130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶
2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（40μg/ml）0.5ml×1瓶
3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶
4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份
5顯色劑a液6ml×1瓶11封板膜2張
6顯色劑b液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)
雞免疫球蛋白y(igy)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含nan3的樣品，因nan3抑制辣根過氧化物酶的（hrp）活性。
雞免疫球蛋白y(igy)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
20μg/ml5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10μg/ml4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
5μg/ml3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.5μg/ml2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.25μg/ml1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品*終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑a50μl，再加入顯色劑b50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)）。
11.測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（od值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，od值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的od值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與od值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的od值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
關(guān)鍵詞：酶標(biāo)儀