elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)加入顯色底物后,標(biāo)準(zhǔn)品有顏色,但結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)吸光值偏低或偏高、標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)梯度等等,總結(jié)如下原因:
一、標(biāo)準(zhǔn)曲線點(diǎn)吸光值偏高,超出儀器檢測(cè)范圍
elisa標(biāo)準(zhǔn)曲線點(diǎn)的吸光值一般在3.0以下,若太高超出儀器檢測(cè)范圍,顯示over flow,可能原因:
1.如od絕對(duì)值靠譜,則顯色過(guò)度tmb顯色體系中建議根據(jù)s1,s2顏色進(jìn)行判斷, 當(dāng)s1,s2深藍(lán)色,有明顯梯度,s5有淡藍(lán)色時(shí)即可終止。
2.僅作單波長(zhǎng)檢測(cè)由于參考波長(zhǎng)讀取非特異性檢測(cè),如指紋、劃痕、水漬等, 對(duì)結(jié)果也有影響。建議終結(jié)果以雙波長(zhǎng)為準(zhǔn)確。
二、標(biāo)準(zhǔn)曲線點(diǎn)吸光值偏低
elisa標(biāo)準(zhǔn)曲線點(diǎn)的吸光值一般要在0.8以上,若小于0.8,可能的原因:
1.粉末標(biāo)準(zhǔn)品未充分溶解粉末標(biāo)準(zhǔn)品按說(shuō)明書(shū)加一定體積的液體后,輕柔混勻, 室溫靜置30分鐘,充分溶解。
3.標(biāo)準(zhǔn)品反復(fù)凍融標(biāo)準(zhǔn)品反復(fù)凍融后活性降低。
4.孵育溫度、時(shí)間按說(shuō)明書(shū)要求孵育條件進(jìn)行孵育。
4.顯色時(shí)間控制tmb顯色體系中建議根據(jù)s1,s2顏色進(jìn)行判斷,當(dāng)s1,s2深藍(lán)色,有明顯梯度,s5有淡藍(lán)色時(shí)即可終止。
三、標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)梯度
elisa 實(shí)驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品2倍倍比稀釋?zhuān)Y(jié)果分析標(biāo)準(zhǔn)曲線沒(méi)有梯度,可能的原因:
1.樣品或標(biāo)準(zhǔn)品污染避免污染
5.錯(cuò)誤的樣品或標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋按照說(shuō)明書(shū)稀釋
6.偶聯(lián)抗體濃度過(guò)高按照說(shuō)明書(shū)調(diào)整到佳的濃度
4.tmb底物孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)調(diào)整到合適的孵育時(shí)間
5.錯(cuò)誤的孵育時(shí)間或溫度按照說(shuō)明書(shū)
6.孵育時(shí)未加蓋導(dǎo)致溶液揮發(fā)和污染貼封片或加蓋
總結(jié)
得到elisa試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線,需要注意幾點(diǎn):
1、 充分溶解標(biāo)準(zhǔn)品;
2、 標(biāo)準(zhǔn)品避免反復(fù)凍融;
3、 梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品注意混勻。