蛋白酶 k(proteinase k)是一種廣譜絲氨酸蛋白酶,蛋白酶 k于1974年在fungus engyodontium album的提取物中發(fā)現(xiàn)。能合成該種蛋白酶的微生物能在以角蛋白(keratin)作為唯1碳源和氮源的環(huán)境中生長，說明該酶可以消化角蛋白，因此被稱為“蛋白酶 k”。蛋白酶k由一條肽鏈組成，含有277個氨基酸，該蛋白的相對分子量~28.9kda，蛋白酶k是一種穩(wěn)定且具有高活性的絲氨酸蛋白酶。晶體和分子結(jié)構(gòu)研究證據(jù)表明該酶屬于枯草素家族，具有活性位點催化三聯(lián)體(asp39-his69-ser224)。蛋白酶k家族包含了各種由革蘭氏陰性細菌、酵母及真菌分泌的細胞內(nèi)肽酶。
蛋白酶k具有非常穩(wěn)定的蛋白結(jié)構(gòu)、超高的蛋白水解活性以及廣泛的底物特異性，偏好于帶有脂肪族及芳香烴的肽鏈，能優(yōu)先分解與含硫氨基酸、疏水性氨基酸、芳香族氨基酸的羧基端連接的肽鍵。與其它的蛋白酶相比較，蛋白酶在一系列廣泛的環(huán)境中均穩(wěn)定：ph，緩沖鹽，去污劑（sds）以及溫度。如：該酶的活力不會被尿素、sds和edta等變性劑抑制，在高溫、高鹽或較高的ph等條件下，蛋白酶k仍能保持非常高活力。因該酶可以在較廣的ph范圍(4～12.5)內(nèi)及高溫(50～70℃)均有活性，在0.1-0.5% sds存在的情況下，蛋白酶k可保持活性，在不損害分離dna完整性的前提下，可以消化dna制劑中的多種蛋白質(zhì)和核酸酶。
蛋白酶k /國家標準:
《蛋白酶k》（gb/t 34793-2017）是2018年5月1日實施的一項中華人民共和國國家標準，歸口于中國標準化研究院?！兜鞍酌竗》（gb/t 34793-2017）規(guī)定了蛋白酶k產(chǎn)品的術(shù)語和定義、技術(shù)要求、試驗方法、檢驗規(guī)則、標志、包裝、運輸及貯存?！兜鞍酌竗》（gb/t 34793-2017）適用于生化試劑蛋白酶k產(chǎn)品的生產(chǎn)和檢測。
蛋白酶k生產(chǎn)過程中的挑戰(zhàn)：
①表達量低：由于蛋白酶k能夠非特異性的降解大多數(shù)蛋白，因此在使用微生物表達生產(chǎn)該蛋白時，其表達的蛋白酶k可以對表達宿主中的有功能的蛋白進行水解，造成表達宿主不能持續(xù)的表達該蛋白，因此蛋白酶k的表達量很低。而篩選高表達量蛋白酶k的表達系統(tǒng)或菌株，需要花費大量的精力和較長的時間。
②不穩(wěn)定性：雖然蛋白酶k可以在高溫、高鹽或較高的ph等苛刻的條件下保持很高的活性，但是該酶可以自己酶解自己，在無保護劑時，在37℃條件下很難長期穩(wěn)定保存。
③該酶易沉淀：在制備蛋白酶k的凍干粉時，為了保證凍干粉中蛋白酶k的固含量維持在一個比較大的水平，通常需要在高濃度時加入凍干保護劑，然而在蛋白酶k濃度達到20mg/ml或者以上時，該酶很容易聚集形成沉淀，這給蛋白酶k的高固含量凍干造成了極大的挑戰(zhàn)。
④生產(chǎn)投入大：在大規(guī)模發(fā)酵時，會產(chǎn)生大量色素和宿主核酸的殘留，簡單的純化工藝很難除去這些雜質(zhì)，而使用復(fù)雜的純化工藝則會降低了回收率并且使生產(chǎn)成本加大。蛋白酶k具有很強的蛋白水解活性，能夠?qū)嶒炇一蜍囬g使用到的其它酶或蛋白水解，所以生產(chǎn)蛋白酶k需要專門的產(chǎn)地、儀器設(shè)備及配套設(shè)施。