中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準
sn/t 0148-2011
代替sn 0148-1992、sn 0153-1992、sn 0154-1992、sn 0155-1992、sn 0161-1992等
進出口水果蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留量檢測方法
氣相色譜和氣相色譜-質(zhì)譜法
1范圍
本標準規(guī)定了水果蔬菜中敵敵畏、乙酰甲胺磷、硫線磷、百治磷、乙拌磷、樂果、甲基對硫磷、毒死蜱、嘧啶磷、倍硫磷、丙蟲硫磷、辛硫磷、滅菌磷、三硫磷、三唑磷、噠嗪硫磷、亞胺硫磷、敵百蟲、滅線磷、甲拌磷、氧化樂果、內(nèi)吸磷、二嗪磷、地蟲硫磷、異稻瘟凈、氯唑磷、甲基毒死蜱、對氧磷、殺螟硫磷、溴硫磷、乙基溴硫磷、噻唑磷、丙溴磷、乙硫磷、敵瘟磷、吡唑硫磷、蠅毒磷、甲胺磷、治螟磷、特丁硫磷、久效磷、除線磷、皮蠅磷、甲基嘧啶磷、對硫磷、甲基毒蟲畏、異柳磷、稻豐散、殺撲磷、甲基硫環(huán)磷、伐殺磷、伏殺硫磷、甲基谷硫磷、二溴磷、速滅磷、甲基乙拌磷、巴胺磷、乙嘧硫磷、磷胺、地毒磷、馬拉硫磷、甲基異柳磷、水胺硫磷、喹硫磷、殺蟲畏、碘硫磷、硫環(huán)磷、威菌磷、苯硫磷、乙基谷硫磷70種有機磷類農(nóng)藥殘留量的氣相色譜及氣相色譜-質(zhì)譜檢測方法。
本標準適用于菠蘿、蘋果、荔枝、胡蘿卜、馬鈴薯、茄子、菠菜、荷蘭豆、鮮木耳、鮮蘑菇、鮮牛蒡、鮮香菇、大蔥中上述70種有機磷類農(nóng)藥殘留量的檢測。
2方法提要
樣品中有機磷農(nóng)藥殘留經(jīng)乙腈提取，過envi-carb/psa小柱凈化，濃縮、定容后，用氣相色譜法（gc- fpd）和氣相色譜-質(zhì)譜法（gc-ms）測定，外標法定量。
3試劑材料
除另有說明外，所用試劑均為分析純，水為去離子水。
3.1乙腈：液相色譜純。
3.2丙酮：液相色譜純。
3.3甲苯：液相色譜純。
3.4乙酸乙酯：液相色譜純。
3.5丙酮-甲苯（65+35，體積比）：量取65 ml丙酮（3.2）和35 ml甲苯（3.3），混勻。
3.6無水硫酸鎂：550℃灼燒4h，在干燥器內(nèi)冷卻至室溫，貯于密封瓶中備用。
3.7氯化鈉：140℃烘烤4 h，在干燥器內(nèi)冷卻至室溫，貯于密封瓶中備用。
3.8 envi-carb/psa復合小柱：500mg/500mg/6ml（本標準中是使用sigma-aldrich/supelco公
司產(chǎn)品完成的（非商業(yè)性聲明：此處列出公司名字僅為工作方便提供參考，并不涉及商業(yè)目的，鼓勵標準使用者嘗試不同廠家的產(chǎn)品。）），或相當者。
3.9 70種有機磷類農(nóng)藥標準物質(zhì)：純度均≥95%，詳細見表a.1。
3.10標準溶液：
3.10.1標準儲備溶液：分別準確稱取10.0mg（按其純度折算為100%）的農(nóng)藥各標準物質(zhì)（3.9）于小燒杯中，用少量丙酮溶解，轉(zhuǎn)移至100 ml容量瓶中，再用少量乙酸乙酯洗滌小燒杯數(shù)次，洗滌液倒入容量瓶中并用乙酸乙酯定容至刻度，混勻，配成標準儲備溶液濃度為100mg/ml。0℃~4℃冷藏保存，備用。
3.10.2混合標準儲備液：將70種有機磷農(nóng)藥分為4組，按照表b.1中的組別，根據(jù)各農(nóng)藥在儀器上的響應值，逐一準確吸取一定體積的同組別的單個農(nóng)藥儲備液分別注入同一容量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度，配制成4組農(nóng)藥混合標準儲備溶液。氣相色譜圖參見圖c.1~圖c.4。
3.10.3混合標準工作溶液：使用前用乙酸乙酯將混合標準儲備液稀釋成所需濃度的標準工作液。
4儀器和設備
4.1氣相色譜儀：配火焰光度檢測器（fpd磷濾光片）。
4.2氣相色譜質(zhì)譜儀：配有電子轟擊電離源（ei）。
4.3分析天平：感量0.1mg和0.01g。
4.4容量瓶：100ml，10ml。
4.5移液器：20μl~200μl和100μl~1 000μl。
4.6玻璃離心管：50ml和15ml具塞
4.7 10ml玻璃刻度試管。
4.8旋渦混合器。
4.9離心機（4000r/min）。
4.10氮吹濃縮儀。
4.11均質(zhì)器。
4.12搗碎機。
5樣品制備與保存
從所取全部樣品中取出有代表性樣品可食部分約500 g，用搗碎機全部磨碎混合均勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器中，密封，并標明標記，于-18℃以下冷凍存放。在樣品制備操作過程中，應防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。
6提取及凈化
6.1提取
稱取均質(zhì)試樣10 g（精確到0.01g），置于50ml玻璃離心管中，加入10 ml乙腈溶液，高速均質(zhì)2 min，再加入約4g無水硫酸鎂和1 g氯化鈉，蓋上塞子劇烈振蕩2 min后，以4000r/min的轉(zhuǎn)速離心4 min，取出乙腈層裝入另一50ml離心管，用10 ml乙腈重復提取一次，合并提取液，并加入1 g無水硫酸鎂，劇烈振蕩后，以4000 r/min的轉(zhuǎn)速離心1 min，移出上清液并濃縮至約1 ml（45℃氮吹），待凈化。
6.2凈化
將envi-carb/psa小柱（3.8）裝在固相萃取裝置上，先用5 ml丙酮-甲苯混合溶劑（3.5）預滿洗小柱，保持流速約為1ml/min。將6.1提取液通過小柱，再用10ml丙酮-甲苯混合溶列洗脫，收集全部洗脫液于10ml玻璃刻度試管，置于40℃下氮吹至近0.5 ml，用乙酸乙酯定容至1.0ml供gc-fpd或gc-ms分析。
6.3測定
6.3.1儀器條件
6.3.1.1氣相色譜儀器條件（gc-fpd）：
a）色譜柱：db-17（30m×0.53mm×0.25μm）石英毛細管柱或相當者；
b）柱箱升溫程序：100℃保持0.5 min，然后以15℃/min升溫至250℃，保持20 min；
c）載氣：氮氣，純度≥99.999%，恒流模式，流量為10ml/min；
d）進樣口溫度：200℃；
e）進樣量：2μl；
f）進樣方式：不分流進樣；
g）檢測器溫度：250℃。
6.3.1.2氣相色譜-質(zhì)譜儀器條件（gc-ms）：
a）色譜柱：db-5ms（30m×0.25 mm×0.25μm）石英毛細管柱或相當者；：
b）柱箱升溫程序：60℃保持6min，然后以10℃/min升溫至250℃，再以15℃/min升溫至280℃，保持6 min；
c）載氣：氦氣，純度≥99. 999%，恒壓模式，壓力為120 kpa；
d）進樣口溫度：220℃；
e）進樣量：1μl；
f）進樣方式：不分流進樣，1.0 min后打開分流閥和隔墊吹掃閥；
g）電子轟擊電離源（ei）：70 ev；
h）離子源溫度：200℃；
i）gc-ms接口溫度250℃；
j）選擇離子監(jiān)測：每個目標化合物選擇1個定量離子和2個~3個定性離子，詳參見表d.1，每組所有需要檢測離子按照出峰順序，分時段分別檢測。每組檢測離子的開始時間和駐留時間參見表e.1。氣相色譜質(zhì)譜選擇離子色譜圖參見圖e.1~圖f.4。
6.3.2氣相色譜法測定
在儀器最佳工作條件下，氣相色譜采用外標法定量。根據(jù)樣液中被測物殘留的含量情況，選定峰面積相近的標準工作溶液。標準工作溶液和樣液中被測物的響應值應在儀器的線性范圍內(nèi)，如果含量超過標準曲線范圍，應稀釋到合適濃度后分析。對標準工作榕液和樣液等體積參差進樣測定。在6.3.1.1色譜條件下，70種有機磷農(nóng)藥在氣相色譜儀上的保留時間、方法的檢出限參見附錄b中的表b.1，氣相色譜圖參見圖c.1~圖c.4。如檢測結果出現(xiàn)陽性，建議使用其他準確定量方法進行測定。
6.3.3氣相色譜-質(zhì)譜法測定
按6.3.1.2色譜質(zhì)譜條件下進行樣品測定，如果樣液保留時間與標準溶液相一致（±0.5%），并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均出現(xiàn)，而且所選擇的離子峰度比與標準樣品的離子相一致，則可判斷樣品中存在這種被測物。使用氣相色譜質(zhì)譜定性分析時相對離子豐度最大允許誤差見表1。
6.3.4空白試驗
除不加試樣外，按上述測定步驟進行。
7結果計算與表述
試樣中每種有機磷農(nóng)藥殘留量按式（1）計算。
式中：
xi——試樣中每種有機磷農(nóng)藥殘留量，單位為毫克每千克（mg/kg）；
ai——樣液中每種有機磷農(nóng)藥的峰面積（或峰高）；
ais——標準工作液中每種有機磷農(nóng)藥的峰面積（或峰高）；
ci——標準工作液中每種有機磷農(nóng)藥的濃度，單位為微克每毫升（μg/ml）；
v——樣液最終定容體積，單位為毫升（ml）；
m——最終樣液代表的試樣質(zhì)量，單位為克（g）。
8測定低限與回收率
8.1、測定低限
本方法中氣相色譜法對菠蘿、蘋果、荔枝、胡蘿卜、馬鈴薯、茄子、菠菜、荷蘭豆、鮮木耳、鮮蘑菇、鮮牛蒡、鮮香菇、大蔥中70種農(nóng)藥的測定低限參見表b.1，氣相色譜質(zhì)譜法的測定低限參見表d.1。
8.2回收率
菠蘿、蘋果、荔枝、胡蘿卜、馬鈴薯、茄子、菠菜、荷蘭豆、鮮木耳、鮮蘑菇、鮮牛蒡、鮮香菇、大蔥中70種農(nóng)藥不同添加水平的平均回收率數(shù)據(jù)參見表g.1。