摘要：建立超液相色譜儀——串聯(lián)質(zhì)譜法鑒別十字花科植物中硫代葡萄糖苷的分析方法。采用70％甲醇水溶液提取白芥種子中的硫代葡萄糖苷，通過反相c12柱分離，電噴霧一離子阱一飛行時(shí)間質(zhì)譜測定。利用硫代葡萄糖苷二級質(zhì)譜裂解產(chǎn)生的m／z l95，241，259，275，291特征離子和伴隨產(chǎn)生的80，162，163，196，242 da中性分子丟失規(guī)律，共鑒別出5種硫代葡萄糖苷。
硫代葡萄糖苷（簡稱硫苷）是廣泛存在于十字花科植物中的含硫次級代謝產(chǎn)物，主要分布于植物的根、莖和葉中。當(dāng)植物細(xì)胞受到破壞（如擠壓、蟲咬等）后，硫苷與植物內(nèi)生的黑芥子酶接觸，降解產(chǎn)生異硫氰酸酯、惡唑烷酮和硫氰酸酯等化合物¨j，其中異硫氰酸酯具有良好的生物活性，而且對人畜無害。因此硫苷及其降解產(chǎn)物的研究引起了科學(xué)工作者的濃厚興趣。根據(jù)側(cè)鏈r基團(tuán)的不同，目前已發(fā)現(xiàn)約l20種硫苷，其中有多種具有抗癌、抗腫瘤、殺菌和殺蟲活性的異硫氰酸酯，如吳華等比較幾種異硫氰酸酯的殺線蟲活性，發(fā)現(xiàn)烯丙基和丙烯?；惲蚯杷狨ゾ哂辛己玫臍⒕€蟲活性。大量研究表明甲硫基己基異硫氰酸酯等具有良好的抗腫瘤活性，是非常具有潛力的抗癌藥物。
硫苷的檢測方法主要是傳統(tǒng)的化學(xué)方法和現(xiàn)代的儀器分析手段。化學(xué)方法耗時(shí)、誤差大、操作繁瑣，只能測定硫苷總量。液相色譜法具有很高的分離效率，但對于硫苷單體鑒別需要對照品，無法滿足
快速鑒別硫苷的需要。筆者采用超液相色譜一離子阱-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，既能分離硫苷，又能準(zhǔn)確、快速鑒別硫苷。對于硫苷及降解產(chǎn)物的研究具有重要意義，同時(shí)又能夠提高工作效率。1實(shí)驗(yàn)部分
1.1主要儀器與試劑
超液相色譜儀-離子阱-飛行時(shí)間質(zhì)譜儀： lcms—it-tof型，日本島津公司；
數(shù)顯恒溫水浴鍋：hh-6型，
真空干燥箱：vd23型，德國81nder公司； 電子天平：auy220型，日本島津公司；
：ks-120e1型
旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：r-216型，瑞士buchl公司；
臺(tái)式高速離心機(jī)：h-1650型，
研磨機(jī)：all基本型，德國ika公司； 白芥種子：產(chǎn)地為湖北武漢；
正己烷、氯仿、乙酸銨、甲酸：分析純
甲醇：色譜純，美國fisher公司；
實(shí)驗(yàn)用水為美國pall公司purelab ultra超純水系統(tǒng)制備的超純水，電阻率為18.2 mq•cm。
1.2硫代葡萄糖苷提取
白芥種子在105℃干燥3h，以滅活黑芥子酶保護(hù)硫苷。干燥種子經(jīng)粉碎后，過420μm篩。稱取粗粉約50g于錐形瓶中，依次用正己烷50ml，氯仿50ml各3次除脂。殘?jiān)?jīng)真空干燥，用300ml沸騰的70％甲醇水溶液浸泡，超聲提取30min，連續(xù)2次，合并提取液，靜置至室溫。提取液經(jīng)離心分離，將清液真空下濃縮至原體積的20％。取lml濃縮液經(jīng)石墨化碳脫色，濾液供超液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析。
1.3流動(dòng)相配制
用電子天平準(zhǔn)確稱量乙酸銨0.385g，置于1l量瓶中，加入lml甲酸，用水溶解定容后，經(jīng)0.22μm微膜過濾，超聲波脫氣后使用。
l.4液質(zhì)聯(lián)用分析條件 （1）uplc條件
ods cl8柱（100mmx 2.1mm，3.5μm，日本島津公司）；柱溫：30℃；流動(dòng)相a：5mmol／l乙酸銨～1‰甲酸溶液；流動(dòng)相b：甲醇；流動(dòng)相流速：0.2 ml／min；進(jìn)樣體積：20μl；梯度洗脫：0～3 min,98%a；3～25min，98％～20％a；25—30min，20％～20％a；30—35min，20％-98％a。
（2）ms條件
esl負(fù)離子模式；電壓：-3.5kv；霧化氣： n2，流量為1.5 l／min；干燥氣壓力：100kpa；碰撞氣：ar；檢測器電壓：1.7 kv；heat block溫度：200℃；cdl溫度：200℃；一級質(zhì)譜掃描范圍：m／z300~700；母離子掃描范圍：m／z 315～650；二級質(zhì)譜掃描范圍：m／z 50~700；離子累積時(shí)間：l0ms； cid碰撞能量：100％；碰撞氣能量：l00％。
2結(jié)果與討論
2.1分析條件選擇
硫苷在水溶液中是親水性陰離子化合物，在反
相色譜柱中，保留時(shí)間短。優(yōu)化實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在ods— c18柱上采用流動(dòng)相a（5mmol／l的乙酸銨+0.1％甲酸）和流動(dòng)相b（甲醇）能夠很好分離，并且有很好的質(zhì)譜響應(yīng)。質(zhì)譜heat block和cdl溫度采用200℃，溫度過高會(huì)造成硫苷裂解，過低則影響離子化和脫溶劑化效果。為獲得比較豐富的二級離子碎片信息，cid碰撞能量和碰撞氣能量均采用100％。2.2分析結(jié)果
按照l.4分析條件檢測白芥種子提取液，獲取硫苷提取離子流色譜圖及其一、二級質(zhì)譜圖（見圖1～圖ll）。根據(jù)裂解機(jī)理，并參考文獻(xiàn)[9一l2]，共鑒定出5種硫苷，結(jié)果見表1。
關(guān)鍵詞：液相色譜儀 色譜儀 飛行時(shí)間質(zhì)譜儀 恒溫水浴鍋 電子天平