sir-actin具有熒光性、細(xì)胞通透性和對(duì)f-actin的高度特異性。sir-actin染色內(nèi)源性的f-actin不需要基因操作或過表達(dá)。它在遠(yuǎn)紅光中的發(fā)射最大限度地降低了光毒性和樣品的自身熒光。sir-actin兼容gfp和/或m-cherry熒光蛋白質(zhì)。它可以用標(biāo)準(zhǔn)的cy5濾鏡進(jìn)行成像。sir-actin可用于活細(xì)胞和組織的寬視場(chǎng)、共聚焦、sim或sted成像。探針數(shù)量允許50 - 200染色實(shí)驗(yàn)。*(*基于以下條件:0.5 - 1ml染色液/ 0.5 - 1um探針濃度的染色實(shí)驗(yàn)。染色實(shí)驗(yàn)的數(shù)量可以通過減少體積或探針濃度來進(jìn)一步增加)。
艾美捷sir-actin試劑盒#cy-sc001物理特性:
abs 652 nm
em 674 nm
ε652 nm 1.0·105 mol-1·cm-1
mw 1241.6 g/mol
mf c71h88n8o10si
sir-actin細(xì)胞成像
sir-actin的成像最好使用標(biāo)準(zhǔn)cy5設(shè)置進(jìn)行。標(biāo)記后,活細(xì)胞可以無需洗滌步驟即可立即成像??蛇x地,一個(gè)簡(jiǎn)單的洗滌步驟包括更換一次用不含探針的新鮮培養(yǎng)基標(biāo)記溶液通常提高信噪比。如果時(shí)間流逝進(jìn)行成像時(shí),建議在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中保持探針濃度等于或低于100nm獲得恒定的信號(hào),并避免探針干擾肌動(dòng)蛋白動(dòng)力學(xué)(減少細(xì)胞增殖)。如果清洗細(xì)胞
在成像之前,染色將持續(xù)幾個(gè)小時(shí)。
探針濃度(nm) 建議標(biāo)記時(shí)間(h)*
> 1000 0.5 - 1
500 3 - 4
200 4 - 6
< 100 6 - 12
sir-actin試劑盒文獻(xiàn)參考:
1. fluorogenic probes for live-cell imaging of the cytoskeleton, g. lukinavi?ius et al., nature methods, 11, 731–733 (2014)