近年來，熒光-pcr法技術(shù)有了重大改進(jìn)。將傳統(tǒng)pcr檢測模式中的pcr擴(kuò)增和檢測相結(jié)合（即在同一個(gè)密閉容器中將pcr擴(kuò)增反應(yīng)與熒光標(biāo)記探針檢測結(jié)合在一起）檢測目的核酸的檢驗(yàn)方法紛紛出臺。這樣的檢測方法稱為“實(shí)時(shí)”pcr，表示pcr擴(kuò)增產(chǎn)物可被實(shí)時(shí)檢測。準(zhǔn)確地說，“實(shí)時(shí)”是指在每一個(gè)pcr循環(huán)后檢測擴(kuò)增產(chǎn)物，當(dāng)pcr擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，我們可得到每個(gè)樣品的pcr擴(kuò)增產(chǎn)物變化曲線。通過分析這些反應(yīng)曲線，不但可得到病原體的定性檢測結(jié)果，還可對病原體的數(shù)量進(jìn)行精確定量。實(shí)時(shí)熒光-pcr法不僅具有普通pcr的高靈敏性，而且由于應(yīng)用了熒光探針，可通過光電傳導(dǎo)系統(tǒng)直接探測pcr擴(kuò)增過程中熒光信號的變化以獲得定量結(jié)果，所以還具有dna雜交的高特異性和光譜技術(shù)的高準(zhǔn)確性，克服了常規(guī)pcr的許多缺點(diǎn)。
熒光-pcr法相比較普通pcr模式的優(yōu)勢：
1.由于實(shí)時(shí)熒光pcr采用封閉的檢測模式，因此擴(kuò)增產(chǎn)物導(dǎo)致污染的可能性比普通pcr要小得多。
2.由于擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測在pcr擴(kuò)增過程中同時(shí)進(jìn)行，并且數(shù)據(jù)的采集、分析全部由儀器自動完成，因此整個(gè)檢測所需的時(shí)間比普通pcr要節(jié)省許多。
3.實(shí)時(shí)熒光pcr檢測模式功能強(qiáng)大，具備定性、定量、突變、多項(xiàng)目等檢測功能。而普通pcr要完成上述項(xiàng)目需采用不同的技術(shù)平臺。
4.實(shí)時(shí)熒光pcr進(jìn)行定量檢測時(shí)，其定量線性范圍（5-6 logs）比普通pcr（2-3 logs）要寬得多。