1.elisa試劑盒收取10~50 g 新鮮的植物安排。
2. 植物安排用冷的無菌水洗刷、吸干,放人液氮中凍結(jié),用研缽和研杵研成細(xì)粉。
3. 將凍結(jié)的細(xì)粉放入250 ml 的離心瓶中,立即參加抽提緩沖液約每克植物5~10 ml,輕輕攪拌混勻。
4. 參加十二烷基肌氨酸鈉使終濃度達(dá)1%,于溫育1~2 h。
5. 用ja-14轉(zhuǎn)子4℃,5 500 g 離心10min 保存上清,必要時(shí)重復(fù)此歩驟以除掉殘?jiān)?br>6. 加人0.6體積yi丙醇,混合,假如看不見沉積,于-20℃放置30 min,用ja-14轉(zhuǎn)子4℃,7 500 g 離心15 min,棄上清。
7.elisa試劑盒沉積用9 ml te緩沖液重懸,參加9.7 g 固體氯化銫,混勻,冰上放置30 min,用ja-14轉(zhuǎn)子,7 500 g 離心10 min,保存上清。
8. 參加0.5 ml 10 mg/ml 的溴化乙錠,冰上放置30 min,4℃ 7500 g 離心10min.
9. 將上清轉(zhuǎn)入兩個(gè)5 ml 的快封超離心管中,并封口。
10. 用vti80轉(zhuǎn)子20℃ 525 000 g 離心4 h,或20℃,300 000 g 離心,用15號(hào)針頭和注射器收集帶。
11. 用氯化艷飽滿的yi丙醇重復(fù)抽提dna以除掉溴化乙錠。
12. 參加2體積水和6體積100%乙醇,混勻,-20℃放置1 h,用ja-20或ja-21轉(zhuǎn)子4℃,7500 g 離心10 min。
13. 沉積用te緩沖液重懸,參加1/10體積的3 mol/l 乙酸鈉和2體積的100%乙酵重懸,重復(fù)離心。
14. 沉積曬干后用te緩沖液重懸elisa試劑盒。