總膳食纖維(tdf)的國標(biāo)測定方法(符合aoac)空白實驗應(yīng)該在整個實驗過程中進行,*后要從結(jié)果中扣除以去掉試劑等因素對結(jié)果的影響。將1克樣品,稱重精度到0.1毫克,在400毫升的燒杯中,混合到50毫升ph為6的磷酸緩沖溶液中,加磁力攪拌子,加100微生的熱穩(wěn)定的α-*溶液,*混合,蓋上鋁箔。放到100度的水浴中,讓樣品溫度保持在95—100度保持15分鐘,控制好溫度,然后從水浴中移出,冷卻到室溫。用10毫升的0.275n的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph到7.5,向gde中添加冷水將溫度降到60度,加100微升的蛋白酶溶液(50毫克放在1毫升磷酸鹽緩沖液中).燒杯蓋上濾箔連續(xù)攪拌的情況下在60度時培養(yǎng)30分鐘。冷卻到室溫,用0.325n的鹽酸調(diào)節(jié)ph到4.0—4.6,用ph計控制ph值。添加300毫升的淀粉葡(萄)糖苷酶( 葡萄糖* )溶液,蓋上鋁箔在連續(xù)攪拌的情況下60度水浴培養(yǎng)30分鐘。拿掉攪拌子,280毫升的95%的乙醇預(yù)熱60度,在室溫下沉降60分鐘。*干凈的玻璃坩堝,放在525度的馬弗爐烘干1小時,冷卻到室溫,用水清洗,在空氣中晾干。添加0.5克的硅藻土,玻璃坩堝在130度的烘箱中恒重一個小時,精度0.1毫克。同硅藻土一起稱重并放在csf6 (fiwe6)的過濾器中,利用真空。用漏斗轉(zhuǎn)移酶消解完的沉淀物,濾出液用導(dǎo)管進行收集。用20毫升的78%的乙醇溶液洗滌沉淀物3次,10毫升的95%的乙醇溶液洗滌2次,10毫升的丙酮溶液洗滌2次。如果膠狀的濾膜使的過濾能力下降,保持液體狀態(tài),用細微的空氣來吹表面(儀器上操作),整個清洗過程需要半個小時。在105度的烘箱中(70度的真空箱中)將玻璃坩堝連同沉淀物和硅藻土一起烘干一個晚上,冷卻到室溫,稱重精度為0.1毫克。沉淀物的重量是*終的重量減掉坩堝的重量和硅藻土的重量(需要的重復(fù)樣)。其中一個沉淀物的樣用凱氏方法分析不能消化的蛋白含量(n*6.25),**個沉淀物的樣在525度的馬弗爐中烘干5個小時,在干燥箱中冷卻稱重(精度0.1毫克),灰份的重量是前步的總重量減掉坩堝和硅藻土的重量后剩下的重量。 計算%空白中的蛋白百分含量(sb)=空白中的蛋白含量/空白的殘留量*100%空白中灰分含量(cb)=空白中的灰分量/空白的殘留量*100空白量=空白中的殘留物*[1-(pb+cb)/100]%樣品的蛋白含量(sp)=樣品中的蛋白量/樣品殘留物量*100%樣品灰分含量(sa)=樣品中灰分量/樣品殘留物量*100%tdf={殘留物量-[(pc+cc)*殘留物量/100]-空白量}/樣品重量*100簡化為:%tdf=[殘留量*(100-pc-cc)-空白量]/樣品重量注:這里的殘留量是指重復(fù)空白或者樣品的所獲得的平均殘留量這里的樣品量是指兩個樣品的平均重量。
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