1.吸附劑的處理及柱子裝填：將一定量薄層層析硅膠裝入搪瓷盤置于烘箱中，于105。c活化2h后，取出放置室溫即可裝柱。柱子采用干法填充，填滿整個(gè)柱體，不留死體積，密封后用柱塞式計(jì)量溶劑泵按丙酮一石油醚(5：95)比例泵入溶劑，至溶劑流出止。
2.上樣：
將冬凌草的乙醇提取物400g用適量丙酮溶解，泵入中壓柱柱頭，然后泵入石油醚1000rid。
3.洗脫：
以一定比例的石油醚一丙酮為洗脫液，60ml/min的流速進(jìn)行梯度洗脫，柱的使用壓力為2～ 3kg/c 。按每份500ml收集，tlc檢識(shí)展開劑丙酮一氯仿(2：8)，顯色劑5%*濃硫酸乙醇液
至洗脫*，相同流份合并，回收溶劑。將冬凌草甲素流份合并蒸干。加入適量甲醇熱溶后自然放置，析出結(jié)晶，為冬凌草甲素。
4.層析柱再生、平衡：
有效成分經(jīng)tlc檢識(shí)全部流出后，用純丙酮5000ml再生，丙酮一石油醚(5：95)平衡后，可再次上樣，反復(fù)使用(使用次數(shù)隨原料不同而異，一般可連續(xù)使用2—6個(gè)月以上)。
5.重結(jié)晶：
冬凌草甲素結(jié)晶析出*后，減壓過(guò)濾，然后用少量甲醇洗滌(洗滌液保留，作下次熱溶冬凌草甲素用)。將冬凌草甲素再用適量甲醇熱溶后放置，結(jié)晶再次析出，待結(jié)晶*后，抽濾，用少量乙醚洗滌，將結(jié)晶室溫下晾干后置真空干燥箱中，35度真空干燥至恒重。密封于瓶中，置干燥器中保存。
6.薄層層析分析：
取適量冬凌草甲素對(duì)照品及由上述方法得到的冬凌草甲素樣品甲醇溶解后點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以氯仿一丙酮(8：2)為展開劑進(jìn)行展開，5% *濃硫酸乙醇液顯色，于105。c烘至斑點(diǎn)清晰。表明在該展開系統(tǒng)下，冬凌草甲素樣品和對(duì)照品都具有相同的rf值，并呈現(xiàn)出同樣的藍(lán)綠色斑點(diǎn)，在制備的冬凌草甲素樣品中，沒(méi)有雜質(zhì)斑痕。