小麥源性成分探針法熒光定量pcr試劑盒原理簡述:
1. taqman熒光探針:pcr擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;pcr擴增時,taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條dna鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與pcr產(chǎn)物形成*同步。而新型taqman-mgb探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析,又可分析基因突變(snp),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的*技術(shù)平臺。
2. sybr熒光染料:在pcr反應(yīng)體系中,加入過量sybr熒光染料,sybr熒光染料非特異性地?fù)饺雂na雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的sybr染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與pcr產(chǎn)物的增加*同步。sybr僅與雙鏈dna進(jìn)行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定pcr反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標(biāo):是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導(dǎo)致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產(chǎn)生熒光。pcr產(chǎn)物生成后,退火過程中,分子信標(biāo)中間部分與特定dna序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。
csc, 小鼠心肌細(xì)胞
小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bmscs）
mef, 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
mm, 小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞
mcf, 小鼠心臟成纖維細(xì)胞
mn-c, 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元
細(xì)胞名稱
人絨毛膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞
人羊膜上皮細(xì)胞
人絨毛間充質(zhì)成纖維細(xì)胞
人羊膜間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞
人絨毛膜間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞
nrk-52e，大鼠腎細(xì)胞
h9c2大鼠心肌細(xì)胞（atcc來源）
c2c12, 小鼠肌原細(xì)胞
nih/3t3, 小鼠成纖維細(xì)胞系
大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bmscs）
hsc-t6, 大鼠肝星狀細(xì)胞系
cho, 中國倉鼠卵巢細(xì)胞系
cos-7l, 非洲綠猴腎成纖維細(xì)胞
sf9, 昆蟲卵巢細(xì)胞
brl 3a, 大鼠肝正常細(xì)胞
hk-2, 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞
het-1a, 人食管上皮細(xì)胞
rgc-5, 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞
gc-1, 鼠精原細(xì)胞
293a，人胚腎上皮細(xì)胞系（腺病毒包裝級別）
hdpscs, 人前磨牙牙髓干細(xì)胞
293t, sv40轉(zhuǎn)化的人胚腎上皮細(xì)胞系