近10年來，低血清和無血清vero細(xì)胞培養(yǎng)基的開發(fā)受到了重視，一些研究機構(gòu)發(fā)布了自己的研究結(jié)果。其中，無血清細(xì)胞培養(yǎng)基開發(fā)的難度大，因為無血清培養(yǎng)系統(tǒng)中的細(xì)胞對于的ph值、溫度、滲透壓、機械力和酶處理更為敏感。換用無血清培養(yǎng)基時，每次傳代常需采用較高的密度接種細(xì)胞，有時細(xì)胞還需要馴化。性能的細(xì)胞培養(yǎng)基則要求能促進細(xì)胞的生長、存活率和細(xì)胞活力，培養(yǎng)的病毒增殖較快，同時價格不過于昂貴。
許多低血清和無血清vero細(xì)胞培養(yǎng)基以傳統(tǒng)的合成培養(yǎng)基為基礎(chǔ)。有機構(gòu)研究了dmem／f12、m199、rpmi1640及mem∶dmem／f12四種培養(yǎng)基對流感病毒增殖的影響1。具體過程為：在上述培養(yǎng)基中分別加入濃度為1.0μg／ml的 tpck*，配制病毒培養(yǎng)液，調(diào)整ph為8.0。將t-225細(xì)胞培養(yǎng)瓶中長成致密單層的sfm-vero細(xì)胞，經(jīng)0.125%的*消化后傳代后，置37℃培養(yǎng)36h；洗液洗滌3次，以moi = 0.1接種h5n1流感病毒，33℃吸附1h；加入病毒培養(yǎng)液，置33℃培養(yǎng)72h，收獲病毒液，測定血凝效價。結(jié)果顯示，細(xì)胞培養(yǎng)時間為36 h。以dmem／f12為基礎(chǔ)培養(yǎng)基時，病毒收獲液的血凝效價均高于其他培養(yǎng)基，m199僅次于dmem／f12。
又有機構(gòu)比較了含10%新生牛血清的m199和mem培養(yǎng)基對vero細(xì)胞生長的影響。發(fā)現(xiàn)m199顯著好于mem。m199培養(yǎng)的細(xì)胞活力為94.35%，mem為80.50%，m199的細(xì)胞濃度為60萬/ml，而mem為47.5萬/ml2。
由于細(xì)胞培養(yǎng)基的成分較為復(fù)雜，且各個成分對細(xì)胞培養(yǎng)存在一定的協(xié)同作用，故以上結(jié)論僅作一定程度上的參考。dmem／f-12是dmem和f-12以1:1的比例混合而成，f-12配方則是以ham's f-10 培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，提高了*、肌醇、腐胺和幾種氨基酸的濃度，初是用于在無血清的條件下培養(yǎng) cho 細(xì)胞。m199培養(yǎng)基則常用于疫苗生產(chǎn)、病毒學(xué)以及多種非轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng)。初的開發(fā)目的是找到一種成分明確的、不含動物來源成分的培養(yǎng)基。有報道將m199改良后，vero細(xì)胞培養(yǎng)效果優(yōu)于m199，且病毒滴度更高3。
sfre m199即是一款m199的改良型，初用于原代狒狒腎(bak)細(xì)胞的生長和維持，后用于vero細(xì)胞的貼壁培養(yǎng)。它在m199培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加了胰島素、丙酮酸鈉、硫酸鋅，并提高了*-鹽酸、半*、*、l -*、l -*、*、*、*和葡萄糖的濃度。它還添加了半乳糖，以避免乳酸過度積累，并使ph值在細(xì)胞延長的維持期內(nèi)，保持在生理范圍。生物科學(xué)公司himedia生產(chǎn)有sfre m199的1型和2型。二者均含有l(wèi)-*、半乳糖和葡萄糖。sfre m199-2（貨號at090）含有earle's鹽，而sfre m199-1含有hank鹽。兩種鹽的主要差別在于*的水平, *在eagles (2.2g/l)比在hanks (0.35g/l) 中高。選用哪種取決于培養(yǎng)環(huán)境中的co2濃度。
sfre m199-1與dmem／f-12的成分作比較，可以發(fā)現(xiàn)，sfre m199-1不含dmem／f-12所含有的硫酸銅、*、*、腐胺、硫鋅酸，但含有dmem／f-12所不含的核苷類成分，如一磷酸腺苷、胸腺嘧啶、*、脫氧核糖、硫酸腺嘌呤等，這些成分都與dna的合成有關(guān)。另外，在一些共有成分上，兩種培養(yǎng)基的成分濃度互有高低，如sfre m199-1的*、*、天*、*、*、*、*、丙酮酸鈉的濃度都比dmem／f-12要高，dmem／f-12的異*、賴氨酸、苯*、*、*、*、*、吡哆醛鹽酸鹽、肌醇、葡萄糖、次黃嘌呤濃度比sfre m199-1的成分濃度高。
目前，由于配方保密，關(guān)于vero細(xì)胞無血清或低血清培養(yǎng)基的具體成分并未*公開。由于改良型m199以及vero細(xì)胞用sfre m199培養(yǎng)時有報道3、4、5可見想見，sfre m199取代m199來大規(guī)模培養(yǎng)vero細(xì)胞，是將來發(fā)展的趨勢。
himedia laboratories公司是的培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家，其生產(chǎn)通過了iso9001、iso13485、who-gmp的質(zhì)量管理體系認(rèn)證。締一生物作為中國區(qū)代理商，在生物制藥，疫苗生產(chǎn)，科研，臨床治療等領(lǐng)域，提供有可靠的各種培養(yǎng)基及進口血清、支原體檢測試劑等，持續(xù)不斷地為中國生物產(chǎn)業(yè)的發(fā)展助力。
參考文獻
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