利用hplc法測定人唾液中*濃度，并觀察其藥代動力學特征. 方法摘要： 采用shimpack clcods c18色譜分析柱 （150 mm×6 mm, 5 μm），以甲醇水（53∶47）為流動相，流速為1.0 ml%26#12539;min-1,檢測波長為212 nm,柱溫為室溫,進樣量50 μl. 根據唾液藥物濃度求算6名健康受試者單劑量口服*片劑的藥代動力學參數. 結果摘要： 本測定方法線形范圍為0.40~4.32 mg%26#12539;l-1，相關系數r=0.999，zui低檢出濃度為30 μg%26#12539;l-1 （按s/n≥3計），方法平均回收率為99.17%-104.80%；日內rsd、日間rsd分別在2.6%-4.9%和3.0%-8.6%. 藥動學參數表明，*人體內過程符合單室開放模型，tmax, cmax, ke, t1/2, auc（0~inf） 分別為（4.50±3.15）h, （1.52±0.22） mg%26#12539;l-1, （0.0090±0.0006） h-1, （77.16±5.26） h, （132.18±8.82） mg%26#12539;h%26#12539;l-1. 單次給藥后，cbz唾液濃度時間曲線出現(xiàn)多峰現(xiàn)象. 結論摘要： 該法簡便、快速、專一性強，適用于*唾液藥物濃度測定及藥代動力學探究之用.
【 色譜法，高壓液相；*；唾液；藥代動力學
0引言
*（carbamazepine， cbz）是臨床上常用的抗癲癇藥. 由于此藥的藥代動力學個體差異大，吸收不規(guī)則，血藥濃度治療窗窄（4~12 mg%26#12539;l-1）,輕易引起毒副反應［1］. 為保證藥品質量及臨床療效，把好臨床合理用藥關［2-4］，有必要對其進行血藥濃度監(jiān)測和個體化用藥. 但血樣采集常增加患者痛苦，且操作較繁瑣［5］，尤其對于嬰幼兒更為不便. 而唾液取樣具有無創(chuàng)傷、經濟簡便、易于接受等優(yōu)點. 為探索用無創(chuàng)傷性生物制品取代血樣的新途徑，通過監(jiān)測唾液中藥物濃度,實現(xiàn)個體化用藥,并在社區(qū)、家庭推廣，取代傳統(tǒng)的患者到醫(yī)院門診抽取血樣的不方便模式，我們利用hplc法測定*唾液濃度，并通過藥代動力學探究，考察其適用性［6］.
1材料和方法
1.1材料① 對象健康受試者6（男3，女3）名，年齡20~25歲，平均（22.2±1.8）歲；體質量42~65 kg，平均（53.7±8.9） kg. 肝腎功能正常，受試前1 wk及受試期間未接受其他藥物. 每位受試者均自愿參加實驗，具體了解實驗過程并簽署知情同意書. ② 儀器lc10avp液相色譜系統(tǒng)（shimadzu，japan）摘要：含兩臺lc10atvp型泵，7725型進樣閥（配100 μl定量環(huán)），cto10asvp柱箱，classvp 5.032色譜工作站（shimadzu，japan），shimpack clcods c18不銹鋼分析色譜柱（150 mm×6 mm，5 μm），3d紫外檢測器；渦旋混合器（xw80型，上海*醫(yī)學院儀器廠）；高速離心機（abbott，usa）. ③ 藥品和試劑*片摘要：上海復旦復華藥業(yè)有限公司生產，批號20030123*標準品摘要：中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇為色譜級,其他試劑均為分析純.
1.2色譜條件色譜柱摘要：shimpack clcods c18柱（150 mm×6 mm，5 μm）；流動相摘要：甲醇水（53∶47）；流速1 ml%26#12539;min-1；檢測波長212 nm；柱溫為室溫；進樣量100 μl.
1.3方法
1.3.1cbz標準液的制備精密稱取4.0 mg的cbz標準品，置于50 ml量瓶中，用甲醇定容，即得濃度為0.08 g%26#12539;l-1的cbz標準液.
1.3.2標準曲線制備取正常人混合空白唾液1 ml 5份，分別加入cbz標準液5，12，24，38和54 μl，配成濃度分別為0.40，0.96，1.92，3.04和4.32 mg%26#12539;l-1的系列標準樣品. 取待測樣品150 μl，加入蛋白沉淀劑150 μl，振蕩混勻后高速離心5 min（4500 g）,取上清液100 μl進樣. 以峰面積為縱坐標（a），cbz濃度為橫坐標（c），進行線形回歸，得回歸方程摘要：c=0.000003247a-0.1738（r=0.999， n=6），唾液中cbz濃度在0.4~4.3 mg%26#12539;l-1范圍內線形關系良好. cbz的zui低檢測濃度為30 μg%26#12539;l-1（s/n≥3）.
1.3.3方法專屬性將空白唾液、cbz標準溶液及供試樣品分別進樣，其三維圖譜分別見fig 1. 在本色譜條件下，cbz的保留時間為7.2 min，唾液中蛋白質等干擾物質和cbz可達基線*分離，確保分析方法的專一性.
1.3.4方法回收率和精密度按“標準曲線制備”項下操作，對已知含cbz 0.40，1.92，4.32 mg %26#12539;l-1低、中、高3種濃度的唾液供試品，于同日內連續(xù)測定5次，計算其日內精密度；對上述3種濃度樣品于5 d內分別進行測定，計算日間精密度；同時計算方法回收率（tab 1）.
1.3.5實驗設計6名受試者實驗前禁食12 h，于次日晨起空腹采集唾液2 ml（空白對照），隨即口服cbz片劑200 mg；并于服藥后1.5, 3, 4.5, 6, 7.5, 9, 10.5, 12, 24, 72, 144和216 h收集唾液2 ml，按“標準曲線制備”項下方法測定唾液中cbz濃度.
表1hplc法測定唾液中*的方法回收率和精密度?。裕?br>圖1*色譜圖?。裕?br>2結果
經計算，6名健康受試者口服200 mg cbz后的平均藥時曲線見fig 2. 消除速率常數ke用消除相中對數藥物濃度時間回歸曲線的斜率求得，以梯形法求算auc, tmax, cmax均采用實測值. 其主要藥動學參數tmax, cmax, ke, t1/2, auc（0~inf）分別為（4.50±3.15）h, （1.52±0.22） mg%26#12539;l-1, （0.0090±0.0006） h-1, （77.16±5.26） h, （132.18±8.82） mg %26#12539;h%26#12539;l-1.
圖2健康受試者口服200 mg*后的平均藥時曲線 （略）
3討論
以hplc法測定血液中cbz的方法已有報道，其樣品預處理方法主要為液液萃取法［7-11］. 我們采用蛋白沉淀法，較萃取法回收率高，操作簡便快速、價廉，而且避免了有機試劑揮發(fā)給操作者帶來的健康損害. 本實驗建立的hplc法測定唾液中的cbz濃度，樣品處理方便，出峰快,10 min即可完成1個樣品分析，分析成本低. cbz和樣品中的蛋白質等雜質分離*，具有較高的專一性. 以峰面積和唾液中藥物濃度之間的線形關系做定量標準，相關性好. 回收率及精密度試驗結果表明，本法回收*，重現(xiàn)性良好，是一種靈敏、專一、快速、簡便的測定方法.
6名健康受試者單劑量口服cbz片劑200 mg的唾液藥濃度經時變化趨向基本相似，但達峰時間具有較大的個體差異（4.50±3.15） h，和文獻報道的結果基本一致［12］，再次證實了對cbz進行治療藥物監(jiān)測,實行個體化用藥的必要性. cbz服藥后吸收較為迅速，t1/2較長,其人體內的藥時曲線符合一級吸收的單室模型. 另外，本次試驗發(fā)現(xiàn)cbz藥時曲線存在多峰現(xiàn)象，6名受試者中，4人出現(xiàn)三峰，2人出現(xiàn)雙峰，cbz多峰現(xiàn)象可能和其胃腸道吸收的非齊性 （unhomogeneous） 和腸肝循環(huán) （enterhepatic circulation，ehc）有關［12，13］. 本次試驗只是單劑量給藥,對cbz片的多峰現(xiàn)象觀察還須在多次給藥達到穩(wěn)態(tài)時的狀態(tài)下繼續(xù)進行觀察. 對多峰現(xiàn)象的探究，可為臨床制訂更平安、有效、合理的給藥方案提供依據，減少不良反應的發(fā)生.
我們建立了簡便、快速檢測唾液中cbz的方法，適用性良好，為以唾液進行cbz治療藥物監(jiān)測提供了依據，也為進一步進行多中心臨床試驗，考察cbz唾液濃度和cbz臨床療效及不良反應發(fā)生率間的關系奠定了基礎.